測定微生物細(xì)胞數(shù)目的方法有很多,介紹幾種
1.血細(xì)胞計數(shù)法
將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計數(shù)板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細(xì)菌數(shù),并求出每個小格所含細(xì)菌的平均數(shù),再以此為依據(jù),估算總菌數(shù).
①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細(xì)菌,應(yīng)當(dāng)取平均值計數(shù).
③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化
2.稀釋涂布平板法
原理：每個活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目
②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低,原因是當(dāng)兩個活多個細(xì)胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定.但不適于測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等.
④此法若不培養(yǎng)成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上,經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數(shù),這樣又稱涂片計數(shù)法.染色可用臺盼藍(lán),臺盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色,可分別計數(shù)死細(xì)胞和活細(xì)胞.
3.濾膜法
濾膜法是當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然后將濾膜干燥、染色,并經(jīng)處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細(xì)菌數(shù).
此法也可以通過培養(yǎng)觀察形成的菌落數(shù)來推算樣品中的菌數(shù).例如測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目：將已知體積的水過濾后,將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng).在該培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色,可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目,計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目.
此法也是統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內(nèi),菌是懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實(shí)驗(yàn)測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi),否則不準(zhǔn)確.
5.顯微鏡直接計數(shù)法
在課本生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐P22中“除了上述活菌計數(shù)法外,顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法.”這里說的顯微鏡直接計數(shù),我認(rèn)為應(yīng)該是在稀釋涂布的基礎(chǔ)上不培養(yǎng)成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數(shù).再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數(shù)法發(fā)展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統(tǒng)計微生物的數(shù)目.