存在兩種可能性,第一,引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤,可以將引物和參考序列進(jìn)行拼接后看看能不能順利拼接,以及拼接之后的目的片段長(zhǎng)度；第二,可能是非特異擴(kuò)增,這個(gè)時(shí)侯如果確定引物位置沒有問題,可以調(diào)整退火溫度,以及PCR體系內(nèi)的各種物質(zhì)濃度,看看能不能得到目的條帶；如果反復(fù)試驗(yàn)都無法得到目的片段,那么就說明您的引物在基因組上可能存在2個(gè)或2個(gè)以上的結(jié)合位點(diǎn),以至于無法得到合格的目的片段,這個(gè)時(shí)候就只能重新設(shè)計(jì)引物了.一般重新設(shè)計(jì)引物都能解決擴(kuò)增問題的,祝好運(yùn)