梯度PCR多半是為第一次使用某條引物,為了摸索最佳退火條件設(shè)定的.拿到引物的時(shí)候,會(huì)得到建議的Tm值,兩條引物不同,你可以換算出一個(gè)退火溫度.但是這個(gè)退火溫度不一定是最佳反應(yīng)條件,所以可以設(shè)定退火的梯度,最常用的是10C,這樣每一個(gè)反應(yīng)是一個(gè)退火溫度,最后電泳可以觀察到,在哪一個(gè)退火溫度下,PCR產(chǎn)物產(chǎn)量和特異性都有保證.這樣后面就可以選這個(gè)溫度進(jìn)行試驗(yàn).
但是對(duì)于已經(jīng)有最佳條件的引物,或是反應(yīng)體系,是不需要做梯度PCR的.