我擴(kuò)增的片段大概1400bp,GC含量較高,用LA Taq可以擴(kuò)增出來,但有突變,用高保真酶又?jǐn)U增不出來,怎么辦?

生物人氣：298 ℃時間：2020-10-01 19:12:17

優(yōu)質(zhì)解答

可用混合酶進(jìn)行擴(kuò)增,一般可以挑到無突變的克隆.
另外可以控制擴(kuò)增的次數(shù),你估計一下模板含量,然后用乘以和擴(kuò)增相關(guān)的系數(shù)2^(0.7*n),其中n為擴(kuò)增次數(shù).這個方法還是比較準(zhǔn)確,控制循環(huán)次數(shù)可以把相差兩個Log的DNA擴(kuò)增到基本相同的含量.你擴(kuò)增的次數(shù)控制在產(chǎn)物總量不要超過500ng（50ul體系）.我喜歡用Pfx（Invitrogen）,擴(kuò)增效率高,突變產(chǎn)物較少.Iproof也可以,產(chǎn)量也不錯.