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  • 關(guān)于PCR溶液體系的配制

    關(guān)于PCR溶液體系的配制
    每個PCR反應(yīng)包括25 ng模板DNA,0.5 μmol/L正反向引物,0.2 mmol/L dNTP mix,0.5個單位的Taq DNA聚合酶和1×PCR buffer(Fermentas),反應(yīng)體系為10μl.請問每個試劑應(yīng)該去多少,buffer試劑是10的.
    生物人氣:985 ℃時間:2020-02-05 20:00:03
    優(yōu)質(zhì)解答

    加入量和濃度有關(guān),只要知道每一個要加入物質(zhì)的濃度就可以算出來了:

    模板的體積=25ng/模板的濃度 (這個值需要測定,如果實在不知道模板濃度,就加0.1-0.5ul左右吧)

    引物的體積=0.5umol/1000uL * 10uL / 引物濃度 (根據(jù)自己配制的情況,有時候可能是100mM或者是200mM)

    Taq酶體積= 0.5 U / Taq 酶活力單位濃度(標注在管子上,U/uL表示的數(shù)字)

    Buffer的量應(yīng)該是1uL.(這里需要解釋一下,經(jīng)過確認,沒有1X的buffer,因為如果是1X的話,沒法加了,所以正確的應(yīng)該是10X的buffer,加入量就是稀釋10倍,所以10uL體系加1uLbuffer)

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