原理：
是來(lái)至于雙脫氧鏈終止法——現(xiàn)在應(yīng)用最多的核酸測(cè)序技術(shù),由Sanger等1977年提出：
模板經(jīng)過(guò)測(cè)序PCR反應(yīng)后形成3'末端帶有熒光標(biāo)記（早期用同位素標(biāo)記）的相差一個(gè)堿基的不同長(zhǎng)度的產(chǎn)物,再根據(jù)每段DNA產(chǎn)物的電泳速度來(lái)檢測(cè)整段DNA的序列.
以上——手打——希望對(duì)你有幫助
優(yōu)點(diǎn)：
一是操作易于標(biāo)準(zhǔn)化與自動(dòng)化,因?yàn)樗且粋€(gè)單一的酶的反應(yīng)過(guò)程,不依賴(lài)于生物體；
二是通過(guò)一次測(cè)序反應(yīng)就能確定樣品中某個(gè)等位基因的順序,而PCR產(chǎn)物克隆后測(cè)序時(shí),樣品順序要在測(cè)定了數(shù)個(gè)克隆片段之后才能確定.因?yàn)橹挥羞@樣,才能區(qū)別突變是基因組本來(lái)就有的,還是由于Tag聚合酶在PCR過(guò)程中錯(cuò)誤摻入核苷酸引起的.PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行測(cè)序，在PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度以后將無(wú)反應(yīng)信號(hào)，機(jī)器將產(chǎn)生許多N值。通常我們很容易辨別PCR產(chǎn)物結(jié)束的位點(diǎn)，PCR產(chǎn)物測(cè)序一般末端的一個(gè)堿基為A（綠色峰），這是由于Taq酶能夠在PCR反應(yīng)的末端非特異性地加上一個(gè)A堿基，我們用T載體克隆PCR產(chǎn)物就是根據(jù)該原理的。在最后一個(gè)堿基A后，信號(hào)會(huì)迅速減弱。因此我們要根據(jù)序列正確判斷出PCR產(chǎn)物的末端序列，在此序列以外就不是我們所要的序列了。 在序列的起始端有時(shí)會(huì)有一些N值。該種情況主要是有未去除的染料單體造成的干擾峰。該干擾峰和正常序列峰重疊在一起，有時(shí)機(jī)器將無(wú)法正確判斷出為何堿基。有時(shí)，在序列的起始端的小片段容易丟失，導(dǎo)致起始區(qū)信號(hào)過(guò)低，機(jī)器有時(shí)也無(wú)法正確判讀。還有，提供的PCR引物用于測(cè)序時(shí)，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生引物二聚體，對(duì)測(cè)序的起始區(qū)造成干擾，在序列的3’端容易產(chǎn)生N值。