以biorad mini protean III為例.
8M urea,0.5xTBE,5%(1:19)bis-AA:AA.取10ml于15ml falcon tube,平衡到室溫或37度.
加入100ul 10% AP(過(guò)硫酸銨),4ul TEMED,顛倒混勻一分鐘.
倒膠,插梳子,置于陽(yáng)光下一個(gè)小時(shí).
將300ml 0.5xTBE 預(yù)熱到60度.
卸膠,取梳子,用ddH2O沖洗梳孔,用濾紙吸干孔內(nèi)余液.
上電泳槽,用預(yù)熱好的TBE進(jìn)行預(yù)電泳,250v,20min.
PAGE Loading buffer:80% deioned formamide,10mM EDTA,BPB & XCY.
將樣品5ul 與5ul loading buffer 混合,70度五分鐘.冷至4度,立即上樣.
預(yù)電泳完畢,用1ml槍吹打PAG膠上樣孔之urea,立即上樣(不超過(guò)5ul,100ng-1ug).
250v電泳15-20min,至BPB正好走出.
卸下玻璃板,以ddH2O沖洗至溫度降至室溫.卸膠.
染色,EB or SYBR gold or gelstar or silver stain.