培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后,用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上,這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作.在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作.
實(shí)驗(yàn)臺(tái)面不論是什么材料,一律要求光滑、水平.光滑是便于用消毒劑擦洗；水平是倒瓊脂培養(yǎng)基時(shí)利于培養(yǎng)皿內(nèi)平板的厚度保持一致.在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上方,空氣流動(dòng)應(yīng)緩慢,雜菌應(yīng)盡量減少,其周圍雜菌也應(yīng)越少越好.為此,必須清掃室內(nèi),關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的門窗,并用消毒劑進(jìn)行空氣消毒處理,盡可能地減少雜菌的數(shù)量.
空氣中的雜菌在氣流小的情況下,隨著灰塵落下,所以接種時(shí),打開(kāi)培養(yǎng)皿的時(shí)間應(yīng)盡量短.用于接種的器具必須經(jīng)干熱或火焰等滅菌.接種環(huán)的火焰滅菌方法：通常接種環(huán)在火焰上充分燒紅（接種柄,一邊轉(zhuǎn)動(dòng)一邊慢慢地來(lái)回通過(guò)火焰三次）,冷卻,先接觸一下培養(yǎng)基,待接種環(huán)冷卻到室溫后,方可用它來(lái)挑取含菌材料或菌體,迅速地接種到新的培養(yǎng)基上.（圖3－4）然后,將接種環(huán)從柄部至環(huán)端逐漸通過(guò)火焰滅菌,復(fù)原.不要直接燒環(huán),以免殘留在接種環(huán)上的菌體爆濺而污染空間.平板接種時(shí),通常把平板的面傾斜,把培養(yǎng)皿的蓋打開(kāi)一小部分進(jìn)行接種.在向培養(yǎng)皿內(nèi)倒培養(yǎng)基或接種時(shí),試管口或瓶壁外面不要接觸底皿邊,試管或瓶口應(yīng)傾斜一下在火焰上通過(guò).