競爭ELISA反應(yīng)中,抗體固定、封閉后,待測抗原和酶標(biāo)抗原一起加和分開加有什么區(qū)別呢?
競爭ELISA反應(yīng)中,抗體固定、封閉后,待測抗原和酶標(biāo)抗原一起加和分開加有什么區(qū)別呢?
分開加是:加入待測抗原后,37度溫育1小時(shí),洗滌,再加入酶標(biāo)抗原,37度溫育1小時(shí),洗滌,然后顯色。
分開加是:加入待測抗原后,37度溫育1小時(shí),洗滌,再加入酶標(biāo)抗原,37度溫育1小時(shí),洗滌,然后顯色。
語文人氣:520 ℃時(shí)間:2020-05-18 06:27:17
優(yōu)質(zhì)解答
一起加更準(zhǔn)確一些.分開加的話,特別是加樣時(shí)間長的話,先加的會(huì)先反應(yīng)上去,這樣不在同一起跑線上,競爭不公平,結(jié)果不準(zhǔn)確.但如果加樣時(shí)間很短(具體多短也不好說),影響小.分開加時(shí),待測抗原與固定抗體反應(yīng),洗滌后,加酶標(biāo)抗體,如果顯色反應(yīng)顏色深,說明待測抗原少,反應(yīng)顏色淺,說明待測抗原多,理論上似乎是可以起到競爭作用的。但一起加和分開加的優(yōu)勢分別是什么呢?開始錯(cuò)誤的理解你的意思,以為是先加,后加,一個(gè)是先混到一起再加。假如抗體為100,抗原(待測)為1-100之間,那么抗體沒有完全被占用,這樣后加的酶標(biāo)抗原能有地方吸附,先加后加一個(gè)樣。假如抗體為100,但抗原為100-200或者更高,而酶標(biāo)抗原可能是10-1000,這樣先加的話,后面的酶標(biāo)抗原就無法吸附。高低結(jié)果都一樣。但一起加入的話,還是能正常的競爭。當(dāng)然,這個(gè)是我的理解。你這個(gè)分步反應(yīng),操作中比較麻煩。一起加的話,一步反應(yīng),出結(jié)果快。那就是一起加比分開加有優(yōu)勢,會(huì)不會(huì)出現(xiàn)不能一起加,只能分開加的情況?應(yīng)該有吧,比如血清中有物質(zhì)對酶有抑制作用。
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