1.盡量選擇厭氧固氮菌適合生長(zhǎng)的環(huán)境采集土壤樣本.
2.制備適合厭氧固氮菌的培養(yǎng)基,滅菌,備用.
3.將土壤樣本中的大塊雜質(zhì)去除,再用水溶解,可用搖床慢速震蕩.
4.梯度稀釋,取不同濃度的土壤溶液涂板,每個(gè)濃度可設(shè)置5-10個(gè)重復(fù).
5.培養(yǎng).
6.在平板上挑取符合厭氧固氮菌菌落形態(tài)的菌落,盡量挑取單菌落,進(jìn)行培養(yǎng).
7.取培養(yǎng)后的菌液劃線,劃出單菌落最好.
8.培養(yǎng).
9.挑取單菌落,用液態(tài)培養(yǎng)基活化,做革蘭氏染色初步驗(yàn)證.
10.利用分子生物學(xué)做序列比對(duì),確認(rèn)所要篩選菌.
這里只是一個(gè)大概流程,自己做的時(shí)候總結(jié)出來的,實(shí)驗(yàn)的時(shí)候可能有些步驟要重復(fù)很多次,不要怕煩,篩選細(xì)菌是很枯燥的事,而且99%的細(xì)菌不能再實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng),耐心點(diǎn)總會(huì)有結(jié)果的.