革蘭氏染色：
（1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同.
（2）晾干：與簡單染色法相同.
（3）固定,與簡單染色法相同
（4）結(jié)晶紫色染色：將玻片置于廢液缸玻片擱架上,加適量（以蓋滿細(xì)菌涂面）的結(jié)晶紫染色液染色1分鐘.
（5）水洗：傾去染色液,用水小心地沖洗.
（6）媒染：滴加盧哥氏碘液,媒染1min.
（7）水洗：用水洗去碘液.
（8）脫色：將玻片傾斜,連續(xù)滴加95%乙醇脫色20—25s至流出液無色,立即水洗.
（9）復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染5min.
（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液.
（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干.
（12）鏡檢：鏡檢時先用低倍,再用高倍,最后用油鏡觀察,并判斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性.
（13）實驗完畢后的處理：
①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈,a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去.b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2—3次.c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次.注意擦鏡頭時向一個方向擦拭.
②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈.
1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色.如脫色過度,革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短,革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌.脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響,難以嚴(yán)格規(guī)定.
2.染色過程中勿使染色液干涸.用水沖洗后,應(yīng)吸去玻片上的殘水,以免染色液被稀釋而影響染色效果.
3.選用幼齡的細(xì)菌.G+菌培養(yǎng)12h-16h,E.coli培養(yǎng)24h.若菌齡太老,由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng).