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  • 呵呵,提取RNA過程?

    呵呵,提取RNA過程?
    生物人氣:873 ℃時(shí)間:2020-03-27 09:36:46
    優(yōu)質(zhì)解答
    現(xiàn)在常用的是Trizol法.
    提前將研缽、研棒、剪刀、鑷子等用錫箔紙包好200度烘烤6小時(shí),與實(shí)驗(yàn)前放到冰箱中預(yù)冷.槍頭、離心管等DEPC水浸泡處理12小時(shí)后,高溫滅菌30分鐘(也可不用DEPC處理,常規(guī)高溫滅菌40分鐘),整個(gè)處理過程必須帶手套(最好帶口罩),否則環(huán)境中的RNA酶會(huì)降解RNA.
    1、取鮮樣或者在-80度保存樣品,液氮研磨樣品至細(xì)小粉末,0.1g樣品加入1mlTrizol混勻,室溫靜置5分鐘.
    2、12000rpm離心十分鐘,取上清至一新的離心管中,加入0.2ml氯仿劇烈晃動(dòng)15秒,室溫靜置2-3分鐘
    3、12000rpm離心十分鐘,取上清至一新的離心管中,加入等體積異丙醇,混勻,室溫靜置10分鐘
    4、12000rpm離心十分鐘,去除上清,用70%乙醇清洗2次,7500rpm離心五分鐘,晾干.(不可過分干燥否則不易溶解)
    5、加入適量DEPC水溶解沉淀
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