基因文庫技術(shù)分離目的基因 所謂文庫(1ibrary)是指一種全體的集合.基因文庫(gene library)則是指某一生物類型全部基因的集合.這種集合是以重組體形式出現(xiàn).某生物DNA片段群體與載體分子重組,重組后轉(zhuǎn)化宿主細胞,轉(zhuǎn)化細胞在選擇培養(yǎng)基上生長出的單個菌落(或噬菌斑)(或成活細胞)即為一個DNA片段的克隆.全部DNA片段克隆的集合體即為該生物的基因文庫. 構(gòu)建基因文庫的意義不只是使生物的遺傳信息以穩(wěn)定的重組體形式貯存起來,更重要的是它是分離克隆目的基因的主要途徑.對于復(fù)雜的染色體DNA分子來說,單個基因所占比例十分微小,要想從龐大的基因組中將其分離出來,一般需要先進行擴增,所以需要構(gòu)建基因文庫.在很多情況下目的基因的分離都離不開基因文庫.此外基因文庫也是復(fù)雜基因組作圖的重要依據(jù).基因文庫構(gòu)建包括以下基本程序： ① DNA提取及片段化,或是cDNA的合成. ② 載體的選擇及制備. ③ DNA片段或cDNA與載體連接. ④ 重組體轉(zhuǎn)化宿主細胞. ⑤ 轉(zhuǎn)化細胞的篩選.當獲得了含重組體的宿主細胞時,即完成了基因的克隆.基因的克隆只是分離基因的基礎(chǔ),基因克隆后還要對克隆的基因進行分離,即利用各種手段把目的基因從文庫中分離出來.分離出目的基因還必須對其進行必要的檢測與分析：如進行序列測定,體外轉(zhuǎn)錄及翻譯、功能互補實驗等.通過這些實驗確定出基因的結(jié)構(gòu)及功能.到這時才能算分離到了目的基因.所以,基因的克隆、克隆基因的分離、分離基因的鑒定是利用基因文庫技術(shù)分離目的基因的主要內(nèi)容