【求助】有關(guān)細(xì)胞劃痕法操作中不明白的
我做的是大鼠血管平滑肌細(xì)胞的遷移能力測(cè)定
給予不同濃度高糖刺激，并給予不同濃度藥物干預(yù)后觀察
這是網(wǎng)上搜到的流程：
先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻得劃?rùn)M線，大約每隔0.1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿。
第二天用槍頭比著直尺，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜。
用PBS洗細(xì)胞3次，去處劃下的細(xì)胞，加入無(wú)血清培養(yǎng)基。
放入37度5%co2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。按0，12，24小時(shí)取樣，拍照。
我的問題是：
司徒鎮(zhèn)強(qiáng)的細(xì)胞培養(yǎng)書中細(xì)胞劃痕的具體操作是：包被基底膜-水化基底膜-制備單層細(xì)胞-人工劃痕-測(cè)量遷移率，但是我看到的網(wǎng)上的資料同上，沒有制備基底膜這步，所以，是不是不用制備基底膜？
2.上面第4步中PBS清洗后是不是可以直接加條件培養(yǎng)基？
3結(jié)果能不能數(shù)4個(gè)不同象限遷移的細(xì)胞數(shù)來(lái)判斷遷移能力？
希望做過這個(gè)實(shí)驗(yàn)的朋友幫忙解答下，
還有就是到了第三步，用槍頭劃之前需要把培養(yǎng)液倒掉嗎？還是劃完后再倒掉舊的培養(yǎng)液換成條件培養(yǎng)基？