上游引物：GAATTCacgcgcaaga ttagg（后面可以繼續(xù)加幾個堿基,用PRIMER 5.0看一下,引物設(shè)計多少個堿基合適,每個基因序列不同.我用TOYOBO的KOD PLUS的話,就一般引物設(shè)計18~22個堿基,一般都能擴(kuò)增出來）
下游引物：GCGGCCGCccttgggaagaaaaagc（后面可以繼續(xù)加幾個堿基,用PRIMER 5.0看一下,引物設(shè)計多少個堿基合適,每個基因序列不同）謝謝你，不過這個要求是什么意思啊“該基因?qū)⒈贿B接到一信號肽編碼序列（…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN…）下游，可形成融合蛋白”那要看你怎么構(gòu)建載體了。方法一：你要么通過酶切的手段，把信號肽先連入載體中，再把基因連入信號肽后?；蛘呦劝鸦蜻B入載體中，再把信號肽連入載體中。方法二：做搭橋PCR。你搜索一下就知道了。汗！我沒有繪圖的工具，以前就面對面直接手寫繪圖解釋了，現(xiàn)在只能幫到你這么多。
想用PCR擴(kuò)增下面一段序列,急求高手寫出上游引物和下游引物.
想用PCR擴(kuò)增下面一段序列,急求高手寫出上游引物和下游引物.
要求上游加EcoRⅠ酶切位點(diǎn)、下游加BamH I酶Not I 切點(diǎn)；該基因?qū)⒈贿B接到一信號肽編碼序列（…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …）下游,可形成融合蛋白,上游引物的切點(diǎn)要滿足需要.
EcoR I:GAATTC Not I:GCGGCCGC
1 acgcgcaaga ttaggtgggg cgccagagcc ggggcacctg cgcaggcttg gctgcgccct
61 ctcgcgccgc acgctctgcg ggttcctccc ttcttccgag cctctcctct ggccgccgcg
121 cgggagagag gccgagatgg cagatgagat tgccaaggct caggtcgctc ggcctggtgg
181 cgacacgatc tttgggaaga tcatccgcaa ggaaatacca gccaaaatca tttttgagga
241 tgaccggtgc cttgctttcc atgacatttc ccctcaagca ccaacacatt ttctggtgat
301 acccaagaaa catatatccc agatttctgt ggcagaagat gatgatgaaa gtcttcttgg
361 acacttaatg attgttggca agaaatgtgc tgctgatctg ggcctgaata agggttatcg
421 aatggtggtg aatgaaggtt cagatggtgg acagtctgtc tatcacgttc atctccatgt
481 tcttggaggt cggcaaatgc attggcctcc tggttaagca cgttttgggg ataattttct
541 cttctttagg caatgattaa gttaggcaat ttccagtatg ttaagtaaca cacttatttt
601 tgcctgtgta tggagagatt caagaaataa ttttaaaacc gcatacataa taaaagacat
661 tgttgcatgg cttatagtct ctctgagtgt tgcgtttgat ttgttatttt aaaaacatat
721 ttgttggaat atgtgaaggt gggtttataa ttttggatgt ttcttgcttt ttcttcccaa
781 gg
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要求上游加EcoRⅠ酶切位點(diǎn)、下游加BamH I酶Not I 切點(diǎn)；該基因?qū)⒈贿B接到一信號肽編碼序列（…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …）下游,可形成融合蛋白,上游引物的切點(diǎn)要滿足需要.
EcoR I:GAATTC Not I:GCGGCCGC
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