分兩種情況,如果引物A能夠與互補鏈完全結(jié)合,那說明引物A的序列與DNA一條單鏈中的某一段序列相同,這樣第四輪PCR產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占比例為100%.
另一種情況,引物A含有酶切位點或更換的堿基,不能與原始DNA完全互補,這時可以用公式(2^n-1)/2^n計算,n為循環(huán)數(shù),第四循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占比例是(2^4-1)/2^4=15/16.
假設(shè)有一段DNA,可以用引物A和引物B擴增目的片段,那么
第一輪循環(huán)產(chǎn)物:兩段DNA,分別含有引物A和引物B,原來的DNA解鏈后,引物A、B分別與互補鏈退火延伸.
第二輪循環(huán)產(chǎn)物:4段DNA,僅有1段沒有引物A.第一輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA,擴增為2后均含有引物A,產(chǎn)物中含有引物B的DNA,類似起始的DNA,擴增為2后,一段含有A,即與含有引物B的單鏈互補退火后延伸的產(chǎn)物,而引物B與另一單鏈退火延伸,所以沒有引物A.以下類似.
第三輪循環(huán)產(chǎn)物:8段DNA,僅有1段沒有引物A,此時真正出現(xiàn)要擴增的目的片段.
第四輪循環(huán)產(chǎn)物:16段DNA,僅有1段沒有引物A,從此輪開始,目的片段以指數(shù)形式擴增.
.
第n輪循環(huán)產(chǎn)物:2^n段DNA,僅有1段沒有引物A.
圖解沒有畫好,自己在紙上比劃一下吧,其實不難,希望有所幫助.
利用PCR技擴增目的基因,從理論上推測,第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為
利用PCR技擴增目的基因,從理論上推測,第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為
請給出詳細(xì)的解釋,比如圖解
請給出詳細(xì)的解釋,比如圖解
其他人氣:215 ℃時間:2020-04-12 14:20:21
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