1、原理與解析
(1)真核細(xì)胞的DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi),RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中.
(2)甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對(duì)DNA和RNA的親和力不同,甲基綠對(duì)DNA親和力強(qiáng),使DNA顯現(xiàn)出綠色,而吡羅紅對(duì)RNA的親和力強(qiáng),使RNA呈現(xiàn)出紅色.用甲基綠、吡羅紅的混合染色劑將細(xì)胞染色,可同時(shí)顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分布.
(3)鹽酸的作用
① 鹽酸能改變細(xì)胞膜的通透性,加速染色劑的跨膜運(yùn)輸；
② 鹽酸使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離,便于DNA與染色劑的結(jié)合.
注意事項(xiàng)
1.材料的選擇
① 選用的實(shí)驗(yàn)材料既要容易獲得,又要便于觀察；
② 常用的觀察材料由人的口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞(為避免原有顏色的干擾,不可使用紫色表皮細(xì)胞)
2.取材要點(diǎn)
① 取口腔上皮細(xì)胞之前,應(yīng)先漱口,以避免裝片中出現(xiàn)太多的雜質(zhì)；
② 取洋蔥表皮細(xì)胞時(shí),盡量避免材料上帶有葉肉組織細(xì)胞.
3.沖洗載玻片時(shí)水的流速要盡量慢,切忌直接用水龍頭沖洗.
4.安全要點(diǎn)
① 用酒精燈烘烤載玻片時(shí),不要只集中于材料處,而應(yīng)將載玻片在火焰上來回移動(dòng),使載玻片均勻受熱,以免破裂；
② 烘烤后的載玻片不要馬上放入盛有稀鹽酸的燒杯中,最好先自然冷卻1分鐘.
5.換用高倍鏡觀察材料時(shí),只能用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行調(diào)焦,切不可動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋.
主要步驟(以觀察口腔上皮細(xì)胞為例)
1.取材
① 滴：在潔凈的載玻片上滴一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的NaCl溶液；
② 刮：用消毒牙簽在口腔內(nèi)側(cè)壁上輕輕地刮幾下；
③ 涂：將牙簽上的碎屑涂抹在載玻片的生理鹽水中；
④ 烘：將涂有口腔上皮細(xì)胞的載玻片在酒精燈的火焰上烘干.
2.水解
① 將烘干的載玻片放入裝有30ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的鹽酸的小燒杯中,進(jìn)行材料的水解；
② 保：將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中保溫5分鐘.
3.沖洗涂片
① 沖：用緩緩的蒸餾水沖洗載玻片10秒鐘；
② 吸：用吸水紙吸去載玻片上的水分.
4.染色
① 染：用2滴吡羅紅甲基綠混合染色劑滴在載玻片上,染色5分鐘；
② 吸：吸去多余染色劑；
③ 蓋：蓋上蓋玻片.
5.觀察
① 低：在低倍物鏡下,尋找染色均勻,色澤淺的區(qū)域,移至視野中央,將物像調(diào)節(jié)清晰；
② 高：轉(zhuǎn)到高倍物鏡,調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色情況.