稀釋法要算李斯特,純種分離技術(shù)要算科赫
要從含有成億個細胞,成百個種類微生物的樣品中分離出某種微生物,并不是容易的事.第一個成功地分離出純種細菌的,是前面提到過的在手術(shù)中采用消毒劑的醫(yī)生李斯特.關(guān)鍵在于他發(fā)明了一種可以取出數(shù)量可以小到0.00062毫升牛奶的微量注射器.因為這樣才可能使樣品中的微生物盡可能少.他用不含任何微生物的滅過菌的水稀釋極少量的牛奶,再把稀釋的牛奶分裝在幾個滅過菌的酒杯中,成功地分離出現(xiàn)在還在制造酸奶中采用的乳酸鏈球菌.這種方法經(jīng)過100多年的改進,現(xiàn)在仍然是一種分離純種微生物的常用方法,叫做系列稀釋法.
李斯特的方法畢竟太麻煩了.比李斯特早幾年,有位科學家把要分離的樣品用滅菌后的水稀釋后放在煮熟的馬鈴薯片上,在溫暖的地方培養(yǎng)幾天后,馬鈴薯上長出星星點點的五顏六色的菌落.當時這位科學家認為至少有一部分菌落是由一個細胞繁殖形成的,如果重復幾次,就可以分離到純培養(yǎng)物.不過,真正解決問題的純種分離方法,是著名的德國醫(yī)生,偉大的微生物學奠基人之一科赫和他的研究小組建立起來的.科赫在明膠中加上一些營養(yǎng)物質(zhì)（例如肉質(zhì)）,加熱融化后倒在一片滅過菌的玻璃片上,待其凝固后,用在火焰上燒紅過,因而燒死了全部原來附著的微生物的白金絲蘸上一點要分離的樣品（因為白金絲燒紅后很快便會冷卻,立即用來蘸樣品時也不會燒死樣品中我們需要分離的微生物.現(xiàn)在我們用電爐絲代替,價格便宜多了,這就是我們今天常見的接種針）,在凝固的明膠上輕輕劃動,使樣品中的很少量微生物沾在明膠上,然后用玻璃罩蓋上玻璃片,以防空氣中的雜菌落下污染.幾天后,明膠板上便長出一個個彼此分開的菌落.這種方法叫做劃線分離法.
德國科學家科赫(Koch)建立了單種微生物分離和純培養(yǎng)技術(shù),利用這些技術(shù)研究炭疽病時,發(fā)現(xiàn)動物的傳染病是由特定的細菌引起的.從而得知,微生物也和高等植物一樣,可以根據(jù)它們的種屬關(guān)系明確地加以區(qū)分,從此以后,各種微生物純培養(yǎng)技術(shù)獲得成功.單種微生物分離和純培養(yǎng)技術(shù)的建立,是食品發(fā)酵與釀造技術(shù)發(fā)展的一個轉(zhuǎn)折點.