出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶
PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致,或大或小,或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶.非特異性條帶的出現(xiàn),其原因：一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、 或引物聚合形成二聚體.二是Mg2+離子濃度過(guò)高、退火溫度過(guò)低,及PCR循環(huán)次數(shù) 過(guò)多有關(guān).其次是酶的質(zhì)和量,往往一些來(lái)源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來(lái)源的酶 則不出現(xiàn),酶量過(guò)多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增.其對(duì)策有：①必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引 物.②減低酶量或調(diào)換另一來(lái)源的酶.③降低引物量,適當(dāng)增加模板量,減少循環(huán)次 數(shù).④適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法(93℃變性,65℃左右退火與延伸).