1.核糖體大、小亞基的分離起始因子3（initiation factors,IF-3）3和IF-1和核糖體結(jié)合,使核糖體大、小亞基分開(kāi),以利于mRNA和fMet-tRNA結(jié)合到核糖體小亞基上.
2.mRNA與小亞基結(jié)合 原核生物中每一個(gè)mRNA的5＇-端都具有核糖體結(jié)合位點(diǎn),它是位于AUG上游8~13個(gè)核苷酸處由4~6個(gè)核苷酸組成的富含嘌呤的序列,又稱(chēng)為SD序列.這段序列正好與30S小亞基中的16s rRNA3’端一部分序列互補(bǔ),因此SD序列又稱(chēng)為核糖體結(jié)合位點(diǎn)（ribosomal binding site,RBS）.緊接SD序列的小段核苷酸又可以被核糖體小亞基蛋白辨認(rèn).原核生物就是靠這種核酸-核酸、核酸-蛋白質(zhì)之間的辨認(rèn)結(jié)合把mRNA結(jié)合到核糖體的小亞基上.該結(jié)合反應(yīng)需IF-3、 IF-1的參與.
3.甲酰甲硫氨酰-tRNA的結(jié)合 在IF-2作用下,fMet-tRNA與mRNA分子中的AUG相結(jié)合,即密碼子與反密碼子配對(duì),此步需要GTP和Mg2+參與.
4.核糖體大小亞基結(jié)合 fMet -tRNA結(jié)合后,IF-3脫離小亞基,隨著IF-3的脫落,核糖體50S大亞基與30S小亞基結(jié)合形成70S的起始復(fù)合物.與此同時(shí)GTP水解,IF-1和IF-2脫離起始復(fù)合物,甲酰甲硫氨酰-tRNA占據(jù)P位,A位是空的,因此與mRNA上第二個(gè)密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酰-tRNA即可進(jìn)入A位.