凝血酶原時間（PT）測定和膽堿酯酶（ChE）活力檢測各有什么臨床意義?
　　凝血酶原是由肝臟合成的一種蛋白質(zhì).凝血酶原試驗是一種了解血液凝固情況的試驗,它可以反映肝臟的凝血功能.凝血酶原時間（PT）和凝血因子Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ有關(guān),而這些因子也均在肝臟合成.凝血酶原時間的正常值為11～15秒（奎氏法）.當(dāng)肝臟出現(xiàn)病變、肝功能不良、上述凝血因子因合成障礙而含量降低時,即可引起凝血酶原時間延長而發(fā)生凝血障礙.如重型肝炎時,凝血酶原時間明顯延長,患者容易出血,預(yù)后較差；慢性活動性肝炎與肝硬變時,凝血酶原時間可輕度延長；肝外阻塞而無明顯肝細(xì)胞損害時,凝血酶原時間可正常.長期肝外阻塞、膽汁淤積、影響維生素K的吸收時,也可導(dǎo)致凝血酶原時間延長；若給患者注射維生素K時,則凝血酶原時間可恢復(fù)正常.
　　此外, 由于凝血酶原半衰期短,在急性重型肝炎發(fā)病后的短時間內(nèi)即有凝血酶原時間的改變,故測定凝血酶原時間,對重型肝炎的診斷,病情和預(yù)后的判定,具有重要的臨床意義.
　　血清膽堿酯酶,又稱“假性”或“非特異性”膽堿酯酶,是由肝臟合成的一種特異性較差的,既可作用于乙酰膽堿,又能作用于其他膽堿酯類的酶.其正常值為0.80～1.00或40單位以上.
　　由于血清膽堿酯酶的半衰期短,所以它是肝內(nèi)損害時的一種極為敏感的、反映肝臟酶合成障礙的試驗.其活性降低的程度往往與肝病的嚴(yán)重程度相一致.如重型肝炎患者膽堿酯酶活性值一般都較正常降低,且降低程度與病情輕重密切相關(guān)；約80％的病人,其血清膽堿酯酶活性可降至正常值的60％,重危病人甚至下降至10％以下,此類患者多很快死亡.因此,血清膽堿酯酶活性的測定,有助于對重型肝炎的診斷及對病情和預(yù)后的判定.此外,重度慢性肝炎和晚期肝硬變患者,血清膽堿酯酶亦有不同程度的降低.
　　血栓與止血實驗室檢查的臨床重要性與日俱增,檢驗內(nèi)容不斷擴(kuò)大,工作量也日益增多；不斷出現(xiàn)的方法更新和試劑商品化、操作自動化,改變了以往靠手工操作、自配試劑、工作效率低的局面.與此同時,方法標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制也顯得格外重要.然而,由于血栓與止血試驗的特殊性 .
　　有關(guān)（凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原(FIB)測定等三項實驗）
　　摘要：對ICSH、ICTH或美國國家臨床生物化學(xué)委員會（NCCLS）等國際以文件形式公布的有關(guān)凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原測定等三項實驗的標(biāo)準(zhǔn)化及其重要性作了簡單敘述.
　　關(guān)鍵詞： 凝血酶原時間 活化的部分凝血活酶時間 纖維蛋白原 標(biāo)準(zhǔn)化
　　由于血栓與止血實驗的特殊性,因此迄今僅有凝血酶原時間（prothrombin time,PT）、活化的部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time,APTT）和纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）等三項實驗有了標(biāo)準(zhǔn)化的試劑（如PT）、標(biāo)準(zhǔn)品（如Fg）、質(zhì)控品和統(tǒng)一的報告形式等；其他,如血小板功能、抗凝因子和纖溶成分等檢測尚缺乏成熟的標(biāo)準(zhǔn)化方案.本文僅就經(jīng)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）國際血栓與止血委員會（ICTH）或美國國家臨床生物化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）等國際組織以文件形式公布的有關(guān)PT、APTT和Fg三項實驗的標(biāo)準(zhǔn)化問題作一簡介.
　　一、標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制的重要性
　　所謂血栓與止血檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制,是指采用統(tǒng)計學(xué)原理,運(yùn)用規(guī)范的物理、化學(xué)、生物學(xué)的方法,對血栓與止血實驗的技術(shù)、操作、儀器、試劑和標(biāo)本等項的質(zhì)量水平,進(jìn)行合理的管理、檢測和評價,以標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制來堵絕誤差,提高實驗的精密度、準(zhǔn)確性和可靠性.標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制的重要性在于：
　　1、為臨床診治提供可靠的依據(jù)：實驗結(jié)果的可靠性是臨床診治疾病的重要依據(jù)和條件.實驗結(jié)果若為假陽性就會造成誤診、誤治；若為假陰性就會造成漏診、漏治；實驗結(jié)果偏高或偏低都會影響患者的診斷、鑒別診斷以及影響醫(yī)師對病情和療效的判斷.
　　2、提高血栓與止血基礎(chǔ)研究的效率和價值：血栓與止血基礎(chǔ)研究的形式就是進(jìn)行各種實驗.實驗可靠性好,就能揭示血栓與止血的客觀規(guī)律,甚至可帶來重大理論突破及（或）社會、經(jīng)濟(jì)效益；若實驗可靠性差或有錯誤,則會造成假象或錯誤理論.
　　3、有助于人群健康調(diào)查和建立血液學(xué)參數(shù)的正常范圍：為了解一定人群的健康水平,建立具有廣泛意義的血液學(xué)參考值的范圍須進(jìn)行較大規(guī)模人群的健康調(diào)查,健康調(diào)查必須要有實驗結(jié)果的可靠性作保障,不然會導(dǎo)致不準(zhǔn)確或錯誤的結(jié)果,故質(zhì)量控制對群體醫(yī)學(xué)也有重要意義.
　　總之,血栓與止血實驗室的質(zhì)量控制,從一定程度上反映一個國家,一個地區(qū),一個單位血栓與止血醫(yī)療水平和研究水平的高低.因此,應(yīng)倍加重視.
　　二、 凝血酶原時間（PT）的標(biāo)準(zhǔn)化
　　自1935年Quick創(chuàng)建凝血酶原時間（prothrombin time,PT）測定方法以來,迄今仍然 是檢查外源凝血系統(tǒng)諸因子及相關(guān)抑制物的重要篩選試驗,PT也是目前口服抗凝劑治療的主要手段.但是,PT測定受多種因素影響,必須對它進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制,以提高PT檢測的精密度、準(zhǔn)確度和可靠性.
　?。ㄒ唬┠冈瓡r間（PT）的標(biāo)準(zhǔn)化問題
　　1、組織凝血活酶標(biāo)準(zhǔn)化：應(yīng)用的國際參考品（international reference preparation IRP）,有下列幾種：
　?。?）單一組織凝血活酶國際參考品：是一種組織提取物的生理鹽水懸液制劑.WHO在英國使用的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的"英國比較凝血活酶"（British comparative thromboplastin,BCT）為基礎(chǔ),制備WHO的原級凝血活酶參考品（primary reference preparation）,如人腦組織凝血活酶,編號67/40.同時又以BCT67/40為基礎(chǔ)標(biāo)化了次級參考品（secondary reference preparation）.如牛腦組織凝血活酶,編號為68/434；兔腦為70/178.后來WHO還公布了一些次級組織凝血活酶參考品,如人腦或胎盤制劑,如BCT/253；兔或兔、猴組織混合制劑,如RBT/79等.
　　（2）復(fù)合組織凝血活酶國際參考品：它是組織提取物的生理鹽水懸液中加入適量的纖維蛋白原、因子V 和氯化鈣組成的制劑,如牛組織凝血活酶OBT/79等.
　　目前世界各國都廣泛應(yīng)用WHO的這些參考品來校正本國或本地區(qū)制備或生產(chǎn)的組織凝血活酶參考物.這樣使世界范圍內(nèi)有了多種組織凝血活酶參考品.
　　2、組織凝血活酶工作制劑（working preparation,WP）的國際敏感度指數(shù)（international sensitivity index,ISI）
　　由于不同組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同.為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結(jié)果,必須要制定一個共同的敏感性指標(biāo).這就需要通過自制的試劑與國際參考品（IRP）進(jìn)行比較,然后得出一個校正值.具體的方法如下：
　　（1）用國際參考品（IRP）標(biāo)定國家、地區(qū)或本實驗室的參考制劑（reference preparation,RP）.
　?。?）用實驗室參考制劑（RP）標(biāo)定工作制劑（WP）.
　　1）標(biāo)本：2份正常人血漿和6份口服抗凝劑達(dá)6周的患者血漿,連收10天,共60份標(biāo)本.
　　2）測定：按一定順序進(jìn)行測定,每份標(biāo)本重復(fù)測定2次.將PT測定的結(jié)果（秒）點在雙 對數(shù)坐標(biāo)紙上,橫坐標(biāo)代表WP的PT測定結(jié)果,縱坐標(biāo)代表RP的PT測定結(jié)果,畫出最佳的各點擬合直線,得出定標(biāo)曲線,通過WP/RP比值,或回歸方程求出斜率b.
　　3）計算WP的ISI值：ISI值愈接近于1.0,表明組織凝血活酶試劑愈敏感,因此,生產(chǎn)和出售組織凝血活酶試劑的廠商,必須在產(chǎn)品上標(biāo)有ISI.
　　3、PT測定結(jié)果的報告方式：理論上,無論何種組織凝血活酶,只要標(biāo)有ISI,就可與國際參考制品進(jìn)行對比校正,并可用同一種計量單位報告.1985年ICSH和ICTH推薦以PT監(jiān)測口服抗凝劑的報告方式是國際正?；嚷剩╥nternational normalizde ratio,INR）.
　　INR的計算公式如下： 在用INR后,各種敏感性不同的組織凝血活酶均可得到相同的INR值.
　　4、儀器特有有ISI：上述PT根據(jù)報告方式適用于手工法（試管傾斜法）測定PT.但是手工法與儀器法以及儀器法與儀器法測定PT的INR之間,仍有差異.研究表明,在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三臺自動化儀器上,使用同一種ISI為1.12的Thromborel S試劑,測定PT的均值分別為10.7秒、12.1秒和11.1秒.但若以同一ISI值計算INR,得出的數(shù)值也存在著不同程度的差異.為此,專家們提出建議：同一組織凝血活酶試劑用于不同儀器時,可用所謂的"儀器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或稱區(qū)域性ISI（Local ISI）來計算INR.每臺儀器所使用的凝血活酶試劑都應(yīng)該有特定的ISI值,重新標(biāo)定ISI值的做法是購買標(biāo)有INR的凍干血漿,然后在自己的儀器上再標(biāo)定所使用凝血活酶試劑的ISI值,這樣才可使病人的INR具有可比性.
　?。ǘ┠冈瓡r間（PT）的推薦方法
　　[原理]
　　將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質(zhì)）和鈣離子,加到枸櫞酸抗凝血漿中,在37℃保溫,測定血漿凝固時間,即為PT.PT主要用于篩選檢測外源凝血系統(tǒng)的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關(guān)因子的抑制物的試驗.
　　[標(biāo)本來集和處理]
　　1、標(biāo)本采集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血,按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中,輕輕混合均勻.
　　2、標(biāo)本處理：以2000～2500g,離心15分鐘,分離乏血小板血漿,并在24小時內(nèi)完成試驗.
　　3、正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上,年齡在18～45歲.但不能是妊娠、月經(jīng)期、哺乳期和口服避孕藥的婦女,采取的血漿冰凍干燥保存或-80℃保存.
　　[試劑]
　　1、抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當(dāng)于含二分子結(jié)晶水的枸櫞酸鈉32g/L）.
　　2、凝血活酶試劑：市售商品,應(yīng)標(biāo)有ISI、批號及有效期.凍干者應(yīng)按說明書加指定的緩沖稀釋劑復(fù)溶.
　　3、氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L.（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好,可不必另配CaCl2液）.
　　4、質(zhì)控物：正常及異常對照血漿
　　5、配制試劑用水必須符合1級純水的標(biāo)準(zhǔn).
　　[儀器]
　　1、手工法：秒表,保持37℃±1℃的恒溫水浴箱或電熱塊.水深能浸試管3cm以上,表面無劃痕的10×mm拭管.經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的0.1mL移液管.經(jīng)校正的秒表.
　　2、儀器法：各種自動或半自動血凝儀,嚴(yán)格按說明書操作.
　　[操作步驟]
　　1、手工法
　?。?）測定溫度36.5～38.5℃,上述各試劑及被測血漿,均應(yīng)預(yù)溫至此一溫度,但凝血活酶試劑預(yù)溫不可超過30分鐘,血漿預(yù)溫一般不宜超過10分鐘.
　?。?）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管.
　?。?）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL,加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻后置37℃水浴中.再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL,（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合,加入0.2mL）.立即混勻并開動秒表：試管仍浸于水浴中,至約10秒鐘時,自水浴中取出,在紗布上迅速擦去試管外水滴,在明亮處不斷傾斜試管,在流動狀態(tài)下觀察有無纖維蛋白形成.一旦見到纖維蛋白（同時將出現(xiàn)液體流動減慢）,立即停表,記錄時間.每次測定二管,按平均數(shù)報告.本試驗的最后混合液其pH應(yīng)為7.2～7.3,大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配制.
　　（4）每批均同時做正常和異常對照,方法應(yīng)與測定標(biāo)本完全相同.
　　[報告方式]
　　1、以PT的秒（S）數(shù)報告（最接近的0.5秒）
　　2、以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告.
　　3、在口服華法令類抗凝藥物治療監(jiān)控時,應(yīng)報告國際正?；嚷剩↖NR）.大部分自動化儀器可根據(jù)所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI,自動算出INR.手工法可根據(jù)下列公式,用一計算器直接計算：
　　Poller設(shè)計了一個簡便的列線圖,在取得PTR和ISI值后,即可從圖上直接查找出INR值,十分便利,國內(nèi)已有介紹.
　　ICSH規(guī)定,不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告.
　　[參考值]
　　因儀器/試劑不同,會得出不同結(jié)果,故很難統(tǒng)一規(guī)定參考值.各實驗室應(yīng)根據(jù)自己的儀器、試劑等條件,自行測定一批健康人,建立參考值.此后至少每年或當(dāng)條件有變化時,根據(jù)新的條件,重新建立.參考值PT測定的一切條件均應(yīng)與患者血漿PT測定相同（包括采血、容器、抗凝劑等）.健康供血者應(yīng)選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經(jīng)期女性,不可服藥,在平靜休息狀態(tài)采血、以減少個體差異（有條件時,可測一批老年人和小兒,分開統(tǒng)計）.同時應(yīng)分開幾天采血和測定,以減少天間差異.測定結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,計算標(biāo)準(zhǔn)差：以兩個標(biāo)準(zhǔn)差（2SD）或95%可信限作為參考范圍.對于三個標(biāo)準(zhǔn)差是正常還是異常,需結(jié)合具體情況進(jìn)行評估.從統(tǒng)計學(xué)上講,其中有些人是正常的.用以上標(biāo)準(zhǔn),病人（PT異常）則很少會遺漏.
　　三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標(biāo)準(zhǔn)化
　?。ㄒ唬┗罨糠帜蠲笗r間(APTT)的標(biāo)準(zhǔn)化
　　APTT是檢測內(nèi)源凝血系統(tǒng)諸凝血因子缺陷和相關(guān)抑制物的篩選試驗,也是當(dāng)前用于凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質(zhì)檢測的主要手段.
　　與PT測定一樣,不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質(zhì)的敏感性相差很大.例如,檢測APTT的試劑中,所用活化劑（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同,他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質(zhì)和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同.
　　迄今,ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化或試劑標(biāo)準(zhǔn)化的可行方案問世,僅NCCLS于1992年,提出一個編號為H29-T的暫行方案.
　?。ǘ┗罨牟糠帜蠲笗r間（APTT）的推薦方法
　　[原理]
　　將一種磷脂和激活劑加到血漿中,經(jīng)過孵育后,加入適當(dāng)濃度的鈣離子.其纖維蛋白凝塊形成的時間（以秒計）,即為APTT.本法主要用于過篩測定內(nèi)源途徑凝血因子的缺陷,如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纖維蛋白原等.同時也用于上述因子的抑制物測定、肝素治療的監(jiān)測以及狼瘡抗凝因子的檢查.
　　[儀器]
　　本實驗所用儀器、設(shè)備（包括采血、貯血容器、加樣裝置和標(biāo)本的處理等）以及對它們的要求完全與PT相同.PT所用自動化儀器同樣適于本實驗.
　　[試劑]
　　1、部分凝血活酶試劑：由商品供應(yīng).一般已與檄活劑按比例配在一起（或分開配制）常用的激活劑由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活劑,由廠方配套供應(yīng).
　　APTT試劑/儀器結(jié)合,應(yīng)能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低于0.3μ/mL（或＜30%）的血漿,出現(xiàn)異常延長的結(jié)果.
　　2、氯化鈣溶液（25mmol/L）以及其它試劑與PT所用者相同.
　　[操作步驟]
　　1、樣品的采取、貯存、輸送與PT測定相同.注意,應(yīng)用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血.
　　2、標(biāo)本（去血小板的血漿）的制備與PT相同.注意、應(yīng)用去血小板血漿測定.
　　3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃,要經(jīng)常檢查是否正確.
　　4、接觸活化時間：加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致；各儀器和試劑生產(chǎn)廠家的規(guī)定可能不一樣,應(yīng)嚴(yán)格按說明書要求進(jìn)行.手工操作時,應(yīng)用秒表或類似的定時裝置計時.
　　5、操作：預(yù)溫（不超過30分鐘）APTT試劑一份與預(yù)溫（不超過10分鐘）的侍測血漿一份混合,立即開動秒表計時；至規(guī)定的接觸活化時間終點時,加人預(yù)溫37℃的CaCl2液一份,混勻,同時開動秒表.至出現(xiàn)血漿凝固時,停表,記錄血漿凝固時間（以秒計）.手工測定時應(yīng)同時測定兩管,按平均數(shù)報告.一些精密度已有很大改進(jìn)的自動或半自動凝血儀,如果有適當(dāng)?shù)馁|(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)也可只測定一次.應(yīng)同時測定正常和異常對照血漿.
　　[參考值]參照PT
　　[特殊解釋]
　　1、對肝素的敏感性：APTT常用于肝素治療的監(jiān)測,通常以患者APTT與正常血漿APTT的比率在1.5～2.5作為治療控制范圍：但不同的試劑/儀器系統(tǒng)對肝素的敏感性不同.其試劑/儀器系統(tǒng)對肝素的敏感性可進(jìn)行測定.體外的敏感性（in vitro sensitlvity）是指將臨床在使用的同類型釣肝素按其治療濃度,加到正常血漿中,測定APTT.體外敏感性與體內(nèi)敏感性（in vivo sensitivity）不等同,但可作參考.
　　2、浪瘡抗凝因子：狼瘡抗凝因子是一種抗磷脂的自身抗體,由于它抗凝血的重要成分磷脂,故能干擾凝血.血中如存在狼瘡抗凝因子,APTT將延長.但APTT試劑對狼瘡抗疑因子的敏感性有很大差別,試劑制造廠家應(yīng)提供足夠的說明,有關(guān)的國家機(jī)構(gòu)也可提供對狼瘡抗凝因子的資抖.但要知道,病人個體之間也有很大差異,沒有一種試劑能測出所有狼瘡抗凝因子.
　　四、纖維蛋白原測定（Fg）的標(biāo)準(zhǔn)化
　?。ㄒ唬├w維蛋白原測定（Fg）的標(biāo)準(zhǔn)化問題
　　纖維蛋白原（死）由肝合成,存在于血漿和體液中,其結(jié)構(gòu)和功能基本已搞清,但迄今仍無理想的臨床檢測方法；文獻(xiàn)報道的測定方法多至10余種,有的精密度、準(zhǔn)確信較好,但過于復(fù)雜、煩瑣；有的雖然簡便、快速,但精密度、準(zhǔn)確性較差.
　　1992年,英國國家生物標(biāo)準(zhǔn)及控制研究所（NIBSC）、研究完成了一個纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)品,編號為89/644,向WHO的生物標(biāo)準(zhǔn)專家委員會（ECBS）推薦,[15]并被ECBC批準(zhǔn)為國際參考品（IRP）.從此,各國均引進(jìn)這一標(biāo)準(zhǔn)品來標(biāo)化本國或廠家生產(chǎn)的次極標(biāo)準(zhǔn)品（我國衛(wèi)生部臨床檢驗中心亦已在引進(jìn)）.使纖維蛋白原測定的標(biāo)準(zhǔn)化工作,走出了關(guān)鍵的一步.因此根據(jù)調(diào)查,各家標(biāo)準(zhǔn)品纖維蛋白原含量差別很大.
　?。ǘ├w維蛋白原（Fg）測定的推薦方法
　　各家用IRP來標(biāo)化自己的標(biāo)準(zhǔn)時,推薦采用Jacobsson的改良法,現(xiàn)將該法介紹如下.
　　[試劑]
　　1、緩沖液：Na2O·2H2O 0.882g；KH2PO4 2.77gl升,此為貯存緩沖液；將貯存緩沖液l份,加生理鹽水2份即為應(yīng)用緩沖液,pH為6.35.
　　2、生理鹽水：0.15mol/L
　　3、人或牛凝血酶：500IU/mL,生理鹽水溶液.
　　4、凝塊溶解劑：尿素400g溶于少量蒸溜水中,200mL 1.Omol/L NaOH,再加水至l升.
　　[操作步驟]
　　將纖維蛋白原凍干（標(biāo)準(zhǔn)）品（源于89/644）加lmL蒸餾水復(fù)溶,加到含有2mL應(yīng)用緩沖液的有機(jī)玻璃淺盤或其他容器中,再加入凝血酶液50μL,迅速混勻,在室溫中靜制置2小時.將容器倒扣于吸水的布上（其下可墊吸水紙）,再用適當(dāng)物質(zhì)（加濾紙）將凝塊吸干.將凝塊取下,置于5OmL生理鹽水中洗滌2次,每次洗滌后均應(yīng)將凝塊吸干（可用玻璃擠壓凝塊）,盡量除去含于凝塊中的液體,以免液體中的其它血漿蛋白殘留.必要時可在清潔棉布上擠壓.
　　小心將凝塊加人含凝塊溶解劑7.5mL的容器中,搖勻,直至凝塊完全溶解.倒人光徑為1cm的比色杯中,以凝塊溶解劑為空白,在280nm和315nm波長讀取吸光度（A）.
　?。ㄈ┻m用的纖維蛋白原（Fg）測定（Clauss法）
　　[原理]
　　將凝血酶加到血漿中,使纖維蛋白原變成纖維蛋白,血漿便出現(xiàn)凝固.在有足量的凝血酶時,與不同含量的纖維蛋白原作用,其出現(xiàn)血漿凝固的時間與纖維蛋白原含量呈負(fù)相關(guān).
　　[試劑]
　　1、牛凝血酶l00NIHU/mL
　　2、纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)品（IRP次級標(biāo)準(zhǔn)）
　　3、緩沖液（下列兩種任選一種）：
　?。?）巴比妥緩沖液（PH7.5）；巴比妥2.5g,巴比妥鈉2.75g,璐氯化鈉7.3g溶于750mL去離子水中,校正至PH7.5,加水至1L.
　?。?）咪唑（Imidazole,或Glyoxaline）緩沖液：咪唑3.4g（0.05mol/L）,氯化鈉5.85g,加于約500mL水中；加O.1mol/L鹽酸186mL,調(diào)PH至7.3-7.4,最后加蒸餾水至1升.
　　[操作步驟]
　　1、手工法
　?。?）用上述緩沖液先將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0.8,1.6,2.4,和4.0g/L纖維蛋白原濃度,各濃度再用緩沖液作1:10稀釋.
　　（2）患者血漿及質(zhì)控物用緩沖液作1:10稀釋.
　?。?）將含100NIHU/mL,牛凝血酶,混勻后室溫保存.如用儀器法測定,則用100NIHU/mL,牛凝血酶,不必稀釋.
　?。?）在一試管中,加稀釋血漿0.2mL,置37℃水浴中4分鐘.
　?。?）加入預(yù)溫37℃的lOONIHU/mL凝血酶液O.2mL,搖勻并立即開動秒表,不斷觀察凝固時間.至出現(xiàn)凝固時停表.
　?。?）每份標(biāo)本測定兩次,求平均數(shù).同時測定各標(biāo)準(zhǔn)管和對照（質(zhì)控）管,方法相同,準(zhǔn)確記錄時間.
　?。?）計算：用雙對數(shù)紙作圖,以凝固時間為縱坐際、纖維蛋白原濃度為橫坐標(biāo),將各相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)管對凝固時間,在圖上標(biāo)出相應(yīng)的點并連成直線,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線.然后根據(jù)患者和質(zhì)控血漿所測得的凝固時間.在圖上查到纖維蛋白原含量.
　　如血漿纖維蛋白原含量大于4g/L,應(yīng)稀釋血漿后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù).如血漿纖維蛋白原含量低于O.8g/L,需將原血漿改為1:2或1:5稀釋,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得結(jié)果后除以5或除以2.
　　2.儀器法：本法可用自動或半自動凝血儀按凝血酶時間（TT）測定法測定.可自動打印出結(jié)果.一般儀器法比手工法精密度高.