果汁－亞硝酸鹽的測定－鹽酸萘乙二胺法
1 范圍
本方法規(guī)定了果汁中亞硝酸鹽的測定方法,其檢出限為1 mg/kg.
2 原理
濃縮果汁、果汁及其飲料中的亞硝酸鹽主要是植物從土壤中吸收后存積地果實中帶來的,多以鈉鹽的形式存在.樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后,在弱酸條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后,再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料,與標準比較定量.
3 試劑
實驗用水為蒸餾水,試劑不加說明者,均勻分析純試劑.
3.1 亞鐵氰化鉀溶液：稱取106.0g亞鐵氰化鉀〔K4Fe(CN)6•3H2O〕,用水溶解,并稀釋至1000mL；
3.2 乙酸鋅溶液：稱取220.0g乙酸鋅〔Zn(CH3COO)2•2H2O〕,加30mL冰乙酸溶于水,并稀釋至1000mL；
3.3 飽和硼砂溶液：稱取5.0g硼酸鈉（Na2B4O7•10H2O）,溶于100mL熱水中,冷卻后備用；
3.4 對氨基苯磺酸溶液（4g/L）：稱取0.4g對氨基苯磺酸,溶于100mL20%鹽酸中,置棕色瓶中混勻,避光保存；
3.5 鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺,溶解于100mL水中,混勻后,置棕色瓶中,避光保存；
3.6 亞硝酸鈉標準溶液：準確稱取0.1000g于硅膠干燥器中干燥24h的亞硝酸鈉,加水溶解移入500 mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻.此溶液每毫升相當于200μg的亞硝酸鈉；
3.7 亞硝酸鈉標準使用液：臨用前,吸取亞硝酸鈉標準溶液5.00mL,置于200mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,此溶液每毫升相當于5.0μg亞硝酸鈉.
4 儀器
4.1 小型絞肉機；
4.2 分光光度計.
5 分析步驟
5.1 樣品處理
稱取約5.0經(jīng)絞碎混勻的試樣,置于70mL燒杯中,加12.5mL硼酸飽和液,攪拌均勻,以70℃左右的水300mL將試樣洗入500mL容量瓶中,于沸水浴中加熱15min,取出后冷至室溫,然后一面轉(zhuǎn)動,一面加入5mL亞鐵氰化鉀溶液,搖勻,再加入5mL乙酸鋅溶液,以沉淀蛋白質(zhì).加水至刻度,搖勻,放置0.5h,除去上層脂肪,清液用濾紙過濾,棄去初濾液30mL,濾液備用.
5.2 測定
吸取40.0mL上述濾液于50mL帶塞比色管中,另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50mL亞硝酸鈉標準使用液（相當于0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5μg亞硝酸鈉）,分別置于50mL帶塞比色管中.于標準管和試樣管中分別加入2mL對氨基苯磺酸溶液（4g/L）,混勻,靜置3min～5min后各加入1mL鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）,加水至刻度,混勻,靜置15min,用2cm比色杯,以零管調(diào)節(jié)零點,于波長538nm處測吸光度,繪制標準曲線.同時做試劑空白.