（1）721-分光光度計
1.接通電源,打開儀器開關(guān),掀開樣品室暗箱蓋,預(yù)熱10分鐘.
2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時,需選用較高檔.）
3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕.
4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),使空白管對準(zhǔn)光路.
5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器,使讀數(shù)盤指針指向T=0處.
6.蓋上暗箱蓋,調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,使空白管的T=100,指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄.
7.比色完畢,關(guān)上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈.
原理:（一）郎伯-比爾定律
光是一種電磁波,具有一定的波長和頻率.可見光的波長范圍在400~760nm,紫外光為200~400nm,紅外光為760~500000nm.可見光因波長不同呈現(xiàn)不同顏色,這些波長在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)不同顏色的光稱單色光.太陽或鎢絲等發(fā)出的白光是復(fù)合光,是各種單色光的混合光.利用棱鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光,即紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等,這就是光譜.有色物質(zhì)溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現(xiàn)不同顏色,而某些無色物質(zhì)能特征性地選擇紫外光或紅外光的能量.物質(zhì)吸收由光源發(fā)出的某些波長的光可形成吸收光譜,由于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同,對光的吸收能力不同,因此每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜,而且在一定條件下其吸收程度與該物質(zhì)的濃度成正比,分光光度法就是利用物質(zhì)的這種吸收特征對不同物質(zhì)進行定性或定量分析的方法.
在比色分析中,有色物質(zhì)溶液顏色的深度決定于入射光的強度、有色物質(zhì)溶液的濃度及液層的厚度.當(dāng)一束單色光照射溶液時,入射光強度愈強,溶液濃度愈大,液層厚度愈厚,溶液對光的吸收愈多,它們之間的關(guān)系,符合物質(zhì)對光吸收的定量定律,即Lambert-Bear 定律.這就是分光光度法用于物質(zhì)定量分析的理論依據(jù).