厭氧菌的培養(yǎng)方法
厭氧菌在有氧的情況下不能生長.要培養(yǎng)厭氧菌,必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境.通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢.如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基,牛心腦浸液培養(yǎng)基等.常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多,可根據(jù)實際情況選用.
1．厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管,可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng),厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養(yǎng)出來.
2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌.塑料袋透明而不透氣,內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑.放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口.先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內(nèi)在半小時內(nèi)造成無氣環(huán)境.如不突變表示袋內(nèi)已達厭氧狀態(tài),可以孵育.
3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今為止國際上公認(rèn)的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器之一.它是一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內(nèi)進行操作,故名.箱側(cè)有一交換室,具有內(nèi)外二門,內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著.欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關(guān)上外門進行抽氣和換氣（H2,CO2,N2）達到厭氧狀態(tài),然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開,將物品移入箱內(nèi),關(guān)上內(nèi)門.箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài),也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理.該箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究,大量培養(yǎng)基可放入作預(yù)還原和厭氧性無菌試驗.金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)節(jié).
4．厭氧盒：原理同厭氧袋,有成品銷售.
5．生物耗氧法：在一密閉的容器內(nèi)放以生物（多是植物）,消耗氧氣,同時產(chǎn)生二氧化碳,供細(xì)菌生長用.我沒見過.
6．焦性末食子酸法：在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙,均勻撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速將已接種細(xì)菌的平板倒扣在上面,用融化的白蠟封邊,造成一個封閉空間.焦性末食子酸與堿反應(yīng)后耗氧.該法用于厭氧不嚴(yán)格的厭氧菌的培養(yǎng),簡單.如有梭狀芽孢桿菌.
7．皰肉培養(yǎng)基：本身就是一個不需特殊設(shè)備的厭氧培養(yǎng)法.皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環(huán)境.