相關(guān)專題重組DNA技術(shù)工具酶
教科書的觀點(diǎn)：DNA連接酶無特異性,其催化dna片段末端連接的情況分兩種：(1)催化相同或互補(bǔ)的黏性末端連接;(2)催化同一種限制酶切割產(chǎn)生的平末端連接.兩種情況下,末端的“拼接”都會(huì)形成“回文序列”.
然而,在基因工程的實(shí)際操作中,催化DNA片段末端連接的方法是非常靈活的.例如,當(dāng)目的序列和載體上沒有相同的
限制性內(nèi)切酶
位點(diǎn)可供利用時(shí),而用不同的限制性內(nèi)切酶切割后的黏性末端不能互補(bǔ)結(jié)合,則可用適當(dāng)?shù)拿笇NA突出的末端削平或補(bǔ)齊成平末端,再用T4DNA連接酶連接,但平末端連接要比黏性末端連接的效率低得多. 由此可見,DNA連接酶可以催化兩種不同限制酶切割產(chǎn)生的平末端連接,而兩個(gè)平末端拼接后,并不是“回文序列”.結(jié)論：DNA連接酶催化兩個(gè)末端連接形成的新序列并不都是“回文序列”.(注：回文序列雙鏈DNA分子中一段旋轉(zhuǎn)對(duì)稱的核苷酸序列,即以對(duì)稱軸為軸心旋轉(zhuǎn)180°后呈對(duì)稱狀態(tài),它是大多數(shù)限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn).《中國百科大辭典》)
在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),最簡(jiǎn)單的重組方式就是在目的基因DNA的兩端用兩種不同的限制性酶進(jìn)行酶切,產(chǎn)生兩個(gè)不同的黏性末端.再用這兩種限制酶對(duì)合適的載體進(jìn)行酶切,也產(chǎn)生兩個(gè)不同的粘性末端.酶切后的目的基因和載體,由于它們各自的兩個(gè)末端不同,都不會(huì)發(fā)生自身環(huán)化.