影響限制性內(nèi)切酶的因素：
DNA制品中的污染（蛋白質(zhì)、酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS)
解決辦法：
增加酶反應(yīng)體積以稀釋可能的抑制劑
增加酶作用單位(過多的甘油抑制酶活性)
延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間 （1-16小時(shí)）
酶的星號(hào)活性*:改變酶切條件時(shí)酶的識(shí)別位點(diǎn)專一性下降的現(xiàn)象.
限制性內(nèi)切酶識(shí)別特異性放寬.
EcoRⅠ在正常情況下識(shí)別GAATTC序列發(fā)生切割,但如果緩沖液中甘油濃度超過5%,其識(shí)別位點(diǎn)發(fā)生松動(dòng),可在AATT處發(fā)生切割,EcoRⅠ這種特殊的識(shí)別能力叫做星活性,用EcoRⅠ*表示.星活性可造成位點(diǎn)切割機(jī)率不等,降解不完全.
影響因素：甘油濃度12-20%,酶與DNA比例,離子強(qiáng)度,45%聚乙二醇(PEG),有機(jī)溶劑,8%二甲基亞楓,二價(jià)陽(yáng)離子,12%乙醇.