1,提取蛋白的時(shí)候要充分超聲粉碎,然后高速離心.吸取上清的時(shí)候不要觸到沉淀.污染不一定是RNA和DNA,還有可能是膠里面有雜質(zhì).
2.遇熱膨脹過度,你可以在電泳槽里面安放冰槽,電泳液預(yù)先降溫,同時(shí)降低電泳時(shí)的電流.還有配瓊脂也要用緩沖液,而不是水,不然不導(dǎo)電.接觸不好也會(huì)引起條帶變形我要的蛋白分子量大概是40K-130K的，那應(yīng)該用多少g離心比較好呢？我是在120V下面跑了2個(gè)小時(shí)，4度的環(huán)境，沒有單獨(dú)設(shè)置電流，那應(yīng)該用多大的電流比較好？瓊脂是買的Bio-Rad的商品瓊脂，好像也沒辦法單獨(dú)加緩沖液。剛剛你這么一說(shuō)，我突然想到我的瓊脂是熱到73度左右就直接加在膠上面了，是不是這個(gè)溫度不合適？那應(yīng)該用什么溫度啊？多謝了！一般離心12000 x g，10分鐘120v 2小時(shí)，肯定要升溫的?？梢远嘣噹讉€(gè)，降低電壓，延長(zhǎng)時(shí)間。瓊脂買回來(lái)是粉吧，配置的時(shí)候要加緩沖液，而不是水來(lái)加熱融化。如果買的是凍結(jié)的瓊脂，要保證充分加熱溶解，知道沒有肉眼可見的顆粒才行。加熱的溫度不用擔(dān)心，反正要等冷了才跑的