Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度
（一）實(shí)驗(yàn)原理
雙縮脲法（Biuret法）和Folin—酚試劑法（Lowry法）的明顯缺點(diǎn)和許多限制,促使科學(xué)家們?nèi)ふ腋玫牡?br/>白質(zhì)溶液測定的方法.
1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Bradford法）,是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的.這種蛋白
質(zhì)測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點(diǎn),因而正在得到廣泛的應(yīng)用.這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測定
法.
考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的最大吸收峰的位置（max）,由465nm變?yōu)?95n
m,溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色.
在595nm下測定的吸光度值A(chǔ)595,與蛋白質(zhì)濃度成正比.
Bradford法的突出優(yōu)點(diǎn)是：
（1）靈敏度高,據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍,其最低蛋白質(zhì)檢測量可達(dá)1g.這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生
的顏色變化很大,蛋白質(zhì)－染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的
多.
（2）測定快速、簡便,只需加一種試劑.完成一個樣品的測定,只需要5分鐘左右.由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的
大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時內(nèi)保持穩(wěn)定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩(wěn)定性最好.
因而完全不用像Lowry法那樣費(fèi)時和嚴(yán)格地控制時間.
（3）干擾物質(zhì)少.如干擾Lowry法的K+、Na+、Mg2+離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不
干擾此測定法.