高效液相色譜使用磷酸鹽做流動相時應(yīng)該注意什么
高效液相色譜使用磷酸鹽做流動相時應(yīng)該注意什么
生物人氣:417 ℃時間:2020-06-05 22:21:28
優(yōu)質(zhì)解答
sunmaocheng(站內(nèi)聯(lián)系TA)是不是在跑液相開始的時候,用磷酸鉀緩沖液和純乙腈先梯度洗脫?huanghaiyu(站內(nèi)聯(lián)系TA)只要鹽完全溶解,一般不會有問題的,如果你確實很擔(dān)心,就把乙腈和鹽按照你的比例混合好,然后裝在一個瓶子了,再進(jìn)樣品,這樣就沒問題了,使用完清洗的時候首先要用95%的水沖洗,避免殘留.癡客(站內(nèi)聯(lián)系TA)以前用PB緩沖液和乙腈跑過,貌似沒出過什么問題,但是后來老師說鹽可能會堵柱子fisherme(站內(nèi)聯(lián)系TA)遇到過這樣的問題,前一天有人用眼做流動相跑了,系統(tǒng)可能沒有沖干凈,隔天再用乙腈系統(tǒng)壓力就會升高,甚至堵住.這明顯是少量鹽溶液在系統(tǒng)內(nèi)有過量的乙腈會洗出鹽結(jié)晶.\x0d其實只要鹽溶液和乙腈比例合適就不會存在析出的問題,關(guān)鍵是使用過后的后處理,也不能直接用100%水來沖,要有個緩沖.算不上經(jīng)驗,交流一下.lihuan0525(站內(nèi)聯(lián)系TA)最關(guān)鍵的就是使用后的及時沖洗.chene(站內(nèi)聯(lián)系TA)主要是要在用完后,耐心把柱子沖趕緊,這很重要,要不下次別人沒法用的同時也耽擱你自己的使用!caozhanglei(站內(nèi)聯(lián)系TA)1.用前要用磷酸調(diào)PH值,使其達(dá)到所要求的PH值.\x0d2.要現(xiàn)用現(xiàn)配,以免時間長緩沖鹽析出和滋生細(xì)菌.\x0d3.要一次配足,多次配的前后緩沖效果不一樣,影響分離效果.\x0d4.磷酸鹽流動相盡量現(xiàn)用現(xiàn)配,不要存放太久,如果晶體析出,會嚴(yán)重?fù)p壞柱子和泵內(nèi)的密封墊圈,還有柱塞桿.\x0d5.流動相溶劑應(yīng)選擇hplc的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑.流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣,清除微粒和灰塵.在送液泵內(nèi),為了防止雜物(固體)進(jìn)入流路,裝有吸濾器,但網(wǎng)孔徑為10μm,比此更小的顆粒仍然可通過,這會導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染.為此,建議常用0.45μm濾膜過濾.流動相溶劑須經(jīng)脫氣,如不脫氣,在溶劑混合時,或壓力溫度變化時容易產(chǎn)生大量氣泡,會導(dǎo)致泵誤動作和輸液不暢,檢測器產(chǎn)生噪聲信號等.\x0d6.流動相恢復(fù)到室溫后使用.流動相溫度與室溫相差時,流動相在恢復(fù)到室溫前,基線水平很難穩(wěn)定,特別是發(fā)生漂移,也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象.水與有機(jī)溶劑混合時,混合液變化大,往往會與室溫相差很大,務(wù)必注意.gdmc041(站內(nèi)聯(lián)系TA)安裝保護(hù)住,再則沖洗好柱子,一般沒有什么大礙了.癡夷子皮(站內(nèi)聯(lián)系TA)緩沖鹽會析出是因為流動相中有機(jī)相(甲醇或乙腈)比例高所致.防止鹽析出就需避免高比例有機(jī)相-緩沖鹽體系的出現(xiàn).\x0d正規(guī)操作1、以流動相平衡色譜柱前,先用50%~90%以上的水平衡約30min,再更換上流動相.\x0d2、使用后,及時以梯度沖洗色譜柱.80%~90%水 0.5ml/min沖約1h,再改用80%~90%有機(jī)相沖約1h,然后以純乙腈沖及保存.
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