1.
（1）E·coli DNA連接酶,來(lái)源于大腸桿菌,可用于連接粘性末端；
（2）T4DNA連接酶：來(lái)源于T4噬菌體,可用于連接粘性末端和平末端,但連接效率低.
（3）熱穩(wěn)定的DNA連接酶（thermostableDNAligase）,是從嗜熱高溫放線菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分離純化的,一種能夠在高溫下催化兩條寡核苷酸探針發(fā)生連接作用的一種核酸酶.
2.
DNA連接酶：連接DNA單鏈與DNA單鏈之間的磷酸二酯鍵
限制性核酸內(nèi)切酶：剪切雙鏈DNA內(nèi)的磷酸二酯鍵
3.
作為運(yùn)載體必須具有三個(gè)條件：
①在宿主細(xì)胞中能保存下來(lái)并能大量復(fù)制；
②有多個(gè)限制酶切點(diǎn),而且每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè),如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識(shí)別位點(diǎn),可適于多種限制酶切割的DNA插入；
③有一定的標(biāo)記基因,便于進(jìn)行篩選.如大腸桿菌的pBR322質(zhì)粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,就可以作為篩選的標(biāo)記基因.一般來(lái)說(shuō),天然運(yùn)載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據(jù)不同的目的和需要,對(duì)運(yùn)載體進(jìn)行人工改建.現(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過(guò)改建的.