是這樣的,放線菌好分離,因?yàn)槊恳恢甓加锌赡軒в心撤N從未被發(fā)現(xiàn)的新的抗生素,難得是后面的檢測(cè)抗生素的過(guò)程.
連續(xù)稀釋分離法
①取1克土樣,在火焰旁放入裝有99毫克無(wú)菌水的錐形瓶?jī)?nèi),充分搖勻,將菌分散.
②用移液管吸取上述菌懸液1毫升,放入盛有9毫升無(wú)菌水的試管中,并進(jìn)一步稀釋成1000倍,即10-3的菌懸液.按10倍稀釋法連續(xù)稀釋到10-8（每1次稀釋,都須更換移液管）.
③取3支1毫升移液管分別從10-8、10-7、10-6菌懸液中吸取1毫升菌懸液,分別注入編號(hào)10-8、10-7和10-6的培養(yǎng)皿內(nèi),同一稀釋液重復(fù)做3個(gè)培養(yǎng)皿.
④將溫度為45～50℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（其成分和配制方法見(jiàn)本章第三節(jié)）倒入上述各培養(yǎng)皿內(nèi),輕輕旋轉(zhuǎn)使菌懸液充分混合均勻,凝固后,將培養(yǎng)皿倒扣放置在溫暖處（28℃左右）,每天觀察培養(yǎng)基表面有無(wú)微生物菌落.
⑤經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)后,培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落,根據(jù)菌落特征,初步判斷屬于何種類型的微生物,并在顯微鏡下檢查,若菌體形態(tài)一致,則可認(rèn)為是初步分離到純菌種放線菌.
⑥將分離培養(yǎng)所得的純菌種,從平板培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到試管斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng).
平板劃線分離法
①取1克土樣,在火焰旁加進(jìn)裝有99毫升無(wú)菌水的錐形瓶中,堵塞棉塞,制成菌懸液待用.
②取一培養(yǎng)皿置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)稍許,向培養(yǎng)皿內(nèi)注入熔化的營(yíng)養(yǎng)固體培養(yǎng)基10～12毫升,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使其中的培養(yǎng)基分布均勻,平放桌上,使其凝成平板.然后在皿底用蠟筆劃分A、B、C、D幾個(gè)區(qū).應(yīng)連續(xù)制作幾份平板培養(yǎng)基.
③將培養(yǎng)皿底部用姆指和無(wú)名指固定成傾斜狀態(tài),在火焰旁將培養(yǎng)皿稍微打開(kāi).在此同時(shí),用環(huán)狀接種針在火焰旁取少許菌懸液,迅速送入培養(yǎng)皿內(nèi),在平板培養(yǎng)基的一邊,作第1次平行劃線 7條,轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角,用燒過(guò)冷卻的接種針,通過(guò)第1次劃線部分作第2次平行劃線,然后再用同樣方法,作第3次平行劃線.劃線時(shí),應(yīng)使平板培養(yǎng)基表面向下,以免空氣中雜菌落入.接種針應(yīng)與平板表面成30°角左右.不要使接種針碰到培養(yǎng)皿邊緣,也不要將培養(yǎng)基劃破.
④將劃線后的培養(yǎng)皿倒放在28℃左右的溫暖處進(jìn)行培養(yǎng),待長(zhǎng)出菌落后,鑒定微生物類群,并根據(jù)鏡檢結(jié)果,判斷是否已分離到了純菌種.如果菌種很純,則可轉(zhuǎn)移到斜面培養(yǎng)基上進(jìn)一步培養(yǎng).
連續(xù)稀釋分離法和平板劃線法,均須在無(wú)菌室或接種箱內(nèi)進(jìn)行.
注：如果菌落的硬度較大,干燥致密,且與基質(zhì)緊密結(jié)合,不易被針挑起,這就是放線菌菌落.