細(xì)胞活性測定方法有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克?。洌┬纬煞ā?H放射性同位素?fù)饺敕āTT法等.其中MTT法以其快速簡便,不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點(diǎn)而得到廣泛的應(yīng)用.但MTT法形成的Formazan為水不溶性的,需要加有機(jī)溶劑溶解,由于在去上清操作時(shí)會(huì)有可能帶走小部分的Formazan,故有時(shí)重復(fù)性略差.為了解決這個(gè)問題,研究人員又開發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如XTT、CCK-8（WST-8）等.
現(xiàn)就這三種四氮唑鹽類方法作一個(gè)簡單介紹：
1.MTT法
MTT：化學(xué)名：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名：噻唑藍(lán).檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲 （Formazan）并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能.二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲 ,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量.在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比.該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等.它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì).
缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲 產(chǎn)物不溶于水,需被溶解后才能檢測.這不僅使工作量增加,也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響,而且溶解甲 的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害.
2.XTT法
XTT：化學(xué)名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide,作為線粒體脫氫酶的作用底物,被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色甲 產(chǎn)物.當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應(yīng)用時(shí),其所產(chǎn)生的水溶性的甲 產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.
優(yōu)點(diǎn)：1、使用方便,省去了洗滌細(xì)胞；2、檢測快速；3、靈敏度高,甚至可以測定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT.
缺點(diǎn)：XTT水溶液不穩(wěn)定,需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用.
3.CCK-8法或稱WST-8法
CCK-8試劑中含有WST–8：化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲 產(chǎn)物（Formazan）.生成的甲 物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量.該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等.
優(yōu)點(diǎn)：1、使用方便,省去了洗滌細(xì)胞,不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；2、檢測快速；3、靈敏度高,甚至可以測定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT；5、對(duì)細(xì)胞毒性??；6、為1瓶溶液,毋需預(yù)制,即開即用.
缺點(diǎn):1、與MTT相比,CCK-8和XTT的價(jià)格比較貴.2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近,不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加.