RT-PCR有兩種解釋：\x0d1,最常用的理RT 是‘逆轉(zhuǎn)錄’（reverse transcription）的縮寫\x0d2,現(xiàn)在也有人這么用：RT是‘實時’（real time）的縮寫\x0d1,先說逆轉(zhuǎn)錄PCR：\x0d這項技術(shù)使用的‘逆轉(zhuǎn)錄酶’來自逆轉(zhuǎn)錄病毒,是一種能按照堿基互補配對原則,以脫氧核糖核苷酸為底物,以寡居dT為引物,把mRNA轉(zhuǎn)換成相應(yīng)DNA的酶,由于該酶的效果與中心法則（DNA所承載的生物信息表達順序應(yīng)該是DNA-RNA-蛋白）順序相反,故而有'逆轉(zhuǎn)錄'之稱.\x0d由于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)使用了引物和模板,也是聚合酶鏈?zhǔn)綌U增的（PCR是‘鏈?zhǔn)綌U增反應(yīng)’polymerase chain reaction 的縮寫）故稱為RT-PCR.\x0d再說其用途：\x0d我們提取的RNA主要是rRNA,即核糖體RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量較少的mRNA,即信使RNA是中心法則所述的遺傳信息表現(xiàn)的中轉(zhuǎn)站,所以我們要把微量的信使RNA搞出來,更重要的是,RNA太容易分解了,環(huán)境中無處不在的RNA酶啊,以及其容易被水解的特點啊,讓你不得不盡快把珍貴的信使RNA轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定的形式,于是就有了RT-PCR.\x0d2, 再說實時PCR\x0d細胞瞬時轉(zhuǎn)錄的mRNA種類頗多,各種mRNA含量也有實時的改變,這反映了細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子根據(jù)環(huán)境要求在做出相應(yīng)的變化,realtime-PCR,以及quantitative realtime-PCR （簡稱qRT-PCR）就應(yīng)運而生.\x0d原理：利用PCR高度的特異性,通過特定的引物能在復(fù)雜樣品中得到的特定序列的DNA,而這種特定DNA的產(chǎn)量跟反應(yīng)初始階段模板量是直接相關(guān)的.簡單說來.經(jīng)過一個PCR循環(huán),可以把一個模板變成兩個,在經(jīng)過一個循環(huán),就會變成四個,以此類推.如果PCR的檢測線是1000個產(chǎn)物,那么當(dāng)你的初始樣品中模板是n個,那就需要經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)為\x0d的時候才能檢測,這就把循環(huán)數(shù)與初始樣品中模板數(shù)聯(lián)系起來了.也就是說經(jīng)過計算,達到檢測限的循環(huán)數(shù)就能反映初始RNA樣品中某種RNA的含量多少.\x0d在實際中,使用了特殊的含有熒光劑的引物,光學(xué)檢測相應(yīng)光強度的產(chǎn)物所需的循環(huán)數(shù),能高度靈敏的達到目的.\x0drealtime-PCR有兩種.絕對定量和相對定量.\x0d絕對定量常用于逆轉(zhuǎn)錄病毒侵染細胞的檢測,比如你想知道有多少HIV侵染了樣本中的T細胞,你可以收集一定數(shù)量的T細胞并提取RNA,通過逆轉(zhuǎn)錄,以及taq酶利用HIV的特異引物進行擴增,最終的循環(huán)數(shù)可以反應(yīng)你的這群T細胞正在被多少個HIV侵染.\x0d相對定量常用于檢測實時的轉(zhuǎn)錄譜,例如在給藥前后,某重要基因轉(zhuǎn)錄的實時變化,可以分別收取給藥前后的全RNA,用相對轉(zhuǎn)錄量不變的基因為內(nèi)參,如GAPDH或beta-actin,與目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄量對比,來定量反應(yīng)藥物對目的基因轉(zhuǎn)錄含量的影響.一氣呵成,難免有錯,看著玩吧