一般來說,弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成,再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇,乙酸乙酯來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性,以達(dá)到好的分離效果,適合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等來調(diào)節(jié),適合于蒽醌、香豆素,以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；強(qiáng)極性溶劑,由正丁醇和水組成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等來調(diào)節(jié),適合于極性很大的生物堿類化合物的分離.很多時候,展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達(dá)到最佳效果.
轉(zhuǎn)自相關(guān)資料：
我們在實驗中,為了實現(xiàn)一個配體與其他雜質(zhì)有效分離,曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合,最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶劑.一般把兩種溶劑混合時,采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開的跡象,再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑）,達(dá)到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點較“拖”）,最好是換溶劑.對于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì),在展開劑里往往加一點點三乙胺,氨水,吡啶等堿性物質(zhì)來中和硅膠的酸性.（選擇所添加的堿性物質(zhì),還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去,氨水無疑是較好的選擇.）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細(xì)程度,酸性強(qiáng)弱不同,從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分離效果很好,但在另一個廠家的就不行.溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對分離效果都有明顯的影響.溫度,濕度對分離效果影響也很明顯,在實驗中我們發(fā)現(xiàn)有時同一展開條件,上下午的Rf截然不同展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮在進(jìn)行薄層層析時,首先應(yīng)該知道未知化學(xué)成分的類型,其極性的大致歸屬,從提取液或從色譜柱的流動相極性可知,另外某樣品里含多種化學(xué)成分先按極性不同大致分,然后細(xì)分,對于分離未知的化學(xué)物質(zhì),展開劑的選擇也是一個摸索的過程,不應(yīng)該僅僅從展開劑考慮,多因素綜合衡量!
溶劑：層析過程中溶劑的選擇,對組分分離關(guān)系極大.在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑,用于薄層或紙層析時常稱展開劑.洗脫劑的選擇,須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時,當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì),一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分,則須選用極性溶劑為洗脫劑.如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠）,則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低.
在柱層操作時,被分離樣品在加樣時可采用于法,亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入.溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的,以便被分離的成分可以被吸附.然后漸增大溶劑的極性.這種極性的增大是一個十分緩慢的過程,稱為“梯度洗脫”,使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫.如果極性增大過訣（梯度太大）,就不能獲得滿意的分離.溶劑的洗脫能力,有時可以用溶劑的介電常數(shù)（ε）來表示.介電常數(shù)高,洗脫能力就大.以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑,如硅膠、氧化鋁.對非極性吸附劑,如活性炭,則正好與上述順序相反,在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用,較在脂溶性溶劑中為強(qiáng).
3．被分離物質(zhì)的性質(zhì)：被分離的物質(zhì)與吸附劑,洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個要素,彼此緊密相連.在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下,各個成分的分離情況,直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān).對極性吸附劑而言,成分的極性大,吸附住強(qiáng).
當(dāng)然,中草藥成分的整體分子觀是重要的,例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多,被吸附的住能就會更大些,在同系物中碳原子數(shù)目少些,被吸附也會強(qiáng)些.總之,只要兩個成分在結(jié)構(gòu)上存在差別,就有可能分離,關(guān)鍵在于條件的選擇.要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì),吸附劑的吸附強(qiáng)度,與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來考慮.首先要考慮被分離物質(zhì)的極性.如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯,或雖含氧但非極性基團(tuán),則需選用吸附性較強(qiáng)的吸附劑,并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫.但多數(shù)中藥成分的極性較大,則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般Ⅲ～Ⅳ級）.采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增,或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況.此外,能否獲得滿意的分離,還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系.現(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系.如有多組分的混合物,象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份.當(dāng)以硅膠為吸附劑時,使油脂被吸附后選用一系列混合溶劑進(jìn)行洗脫,油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫.
又如對于C-27甾體皂甙元類成分,能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中,加于氧化鋁的吸附柱上,采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫.如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁,由于硅酸鎂的吸附性較弱,洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低,亦即采用苯或含5％氯仿的苯,即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來.這一例子說明,同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時,需用不同的溶劑才能達(dá)到相同的分離效果,從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系.