標準曲線的作法
(1)標準液濃度的選擇：在制備標準曲線時,標準液濃度選擇一般應(yīng)能包括待測樣品的可能變異最低與最高值,一般可選擇5種濃度.濃度差距最好是成倍增加或等級增加,并應(yīng)與被測液同樣條件下顯色測定.
(2)標準液的測定：在比色時,讀取光密度至少讀2-3次,求其平均值,以減少儀器不穩(wěn)定而產(chǎn)生的誤差.
(3)標準曲線圖的繪制：一般常用的是光密度一濃度標準曲線.
①用普通方格紙作圖.圖紙最好是正方形(長：寬=l：1)或長方形(長：寬=3 ：2),以橫軸為濃度,縱軸為光密度,一般濃度的全距占用了多少格,光密度的全距也應(yīng)占用相同的格數(shù).
在適當范圍內(nèi)配制各種不同濃度的標準液,求其光密度,繪制標準曲線,以濃度位置向上延長,光密度位置向右延長、交點即為此座標標點.然后,將各座標點和原點聯(lián)成一條線,若符合Lambert-Beer氏定律,則系通過原點的直線.
②若各點不在一直線,則可通過原點,盡可能使直線通過更多點,使不在直線上的點盡量均勻地分布在直線的兩邊.
③標準曲線繪制完畢以后,應(yīng)在座標紙上注明實驗項目的名稱,所使用比色計的型號和儀器編號、濾光片號碼或單色光波長以及繪制的日期、室溫.
④繪制標準曲線：一般應(yīng)作二次或三次以上的平行測定,重復(fù)性良好曲線方可應(yīng)用.
⑤繪制好的標準曲線只能供以后在相同條件下操作測定相同物質(zhì)時使用.當更換儀器、移動儀器位置、調(diào)換試劑及室溫有明顯改變時,標準曲線需重新繪制.
⑥標準曲線橫坐標的標度：從標準液的含量換算成待測液的濃度.