組成核酸分子的堿基,均具有一定的吸收紫外線特性,最大吸收值在波長為250~270nm之間.核酸的最大吸收波長是260nm,這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎(chǔ).
在波長260nm紫外線下,1OD值的光密度相當(dāng)于雙鏈DNA濃度為50μg/ml;單鏈DNA或RNA為20μg/ml.可以次來計算核酸樣品的濃度.
分光光度法不但能確定核酸的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的紫外線吸收值的比值(A260/A280)估計核酸的純度.DNA的比值為1.8,RNA的比值為2.0.若DNA比值高于1.8,說明制劑中RNA尚未除盡.RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白質(zhì)將導(dǎo)致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干擾.當(dāng)然也會出現(xiàn)既含蛋白質(zhì)又含RNA的DNA溶液比值為1.8的情況,所以有必要結(jié)合凝膠電泳等方法鑒定有無RNA.或用測定蛋白質(zhì)的方法檢測是否存在蛋白質(zhì).紫外分光光度法只用于測定濃度大于0.25μg/ml的核酸溶液.對于很稀的溶液可采用熒光光度法.