我提取RNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,我要由此擴(kuò)增功能基因,請(qǐng)問引物設(shè)計(jì)時(shí),用查到的mRNA序列,還是用cDNA序列
我提取RNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,我要由此擴(kuò)增功能基因,請(qǐng)問引物設(shè)計(jì)時(shí),用查到的mRNA序列,還是用cDNA序列
我要克隆一個(gè)基因,從NCBI查到該基因近似物種的mRNA(沒有查到cDNA).
我的路線是先提取RNA,反轉(zhuǎn)錄成為cDNA,由cDNA進(jìn)行PCR,得到該基因.但是,在引物設(shè)計(jì)時(shí),我不清楚是應(yīng)該用近似物種的mRNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì),還是用cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì).如果用cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì)的話,我是否只需用在線工具轉(zhuǎn)換一下即可?
我要克隆一個(gè)基因,從NCBI查到該基因近似物種的mRNA(沒有查到cDNA).
我的路線是先提取RNA,反轉(zhuǎn)錄成為cDNA,由cDNA進(jìn)行PCR,得到該基因.但是,在引物設(shè)計(jì)時(shí),我不清楚是應(yīng)該用近似物種的mRNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì),還是用cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì).如果用cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì)的話,我是否只需用在線工具轉(zhuǎn)換一下即可?
其他人氣：376 ℃時(shí)間：2020-01-27 04:31:27
優(yōu)質(zhì)解答
理論應(yīng)該用CDNA進(jìn)行因?yàn)樵O(shè)計(jì),但要保證你提取的mRNA的質(zhì)量,盡量減少降解.可以在原序列基礎(chǔ)上先寫出互補(bǔ)序列再進(jìn)行引物設(shè)計(jì).
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