兩個(gè)片段的大小不能太大.
中間重疊部分不能太短,至少要有20nt以上.30,40比較好.謝謝！是3個(gè)片段拼接，長度分別為900bp，1300bp，300bp，3個(gè)片段擴(kuò)的很亮，引物拼接區(qū)重疊堿基20多個(gè)應(yīng)該足夠了，就是拼接區(qū)GC含量較高70%多，全長GC55%。這個(gè)估計(jì)不行..一方面900和1300片段太大了..20多個(gè)重疊對于這么大的片段來說,實(shí)在太小了...另一方面,GC含量高,不容易配對啊..你可以嘗試多分幾段,慢慢連一起,可能會(huì)成功..