標準的PCR反應體系：10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10～100pmol
模板DNA 0.2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul PCR反應五要素：參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度.理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增.設(shè)計引物應遵循以下原則：①引物長度：15-30bp,常用為20bp左右.②引物擴增跨度：以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段.③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶.ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶.⑤引物3’端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗.⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處.⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性
希望有所幫助