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  • 大腸桿菌染色體實驗中為什么提取不出DNA?那個步驟出問題了呢?

    大腸桿菌染色體實驗中為什么提取不出DNA?那個步驟出問題了呢?
    生物人氣:723 ℃時間:2020-02-03 06:53:11
    優(yōu)質(zhì)解答
    (1)將2mL培養(yǎng)至對數(shù)期的大腸桿菌DH5α菌液5000rpm冷凍離心10min棄上清;
    (2)加190μL TE懸浮沉淀,并加10μL 10%SDS,1μL 20mg/mL蛋白酶K,混勻,37℃保溫1h;
    (3)加30μL 5mol/L NaCl,混勻;
    (4)加30μL CTAB/NaCl溶液,混勻,65℃保溫20min;
    (5)加入300μL酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提,5000rpm離心10min,將上清液移至干凈離心管;
    (6)加入300μL氯仿/異戊醇(24:1)抽提,取上清液移至干凈管中;
    (7)加300μL異丙醇,顛倒混合,室溫下靜止10min,沉淀DNA;
    (8)5000rpm離心10min,沉淀DNA,加入500μL70%乙醇,5000rpm離心10min,棄乙醇,吸干;
    (9)溶解于20μLTE,取3μL 用于瓊脂糖凝膠電泳驗證,其余-20℃保存.
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