1、細(xì)菌常規(guī)鑒定方法
1.1 免疫診斷技術(shù)
1.1.1凝集試驗(yàn)
目前常用的是葡萄球菌協(xié)同凝集試驗(yàn)(SPA - CoA) ,金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的A 蛋白(SPA) 能與動(dòng)物血清中IgG的Fc 結(jié)合,成為致敏的顆粒載體,特異性IgG的Fc 與SPA 結(jié)合后,F (ab’) 2 段暴露在葡萄球菌表面,與相應(yīng)細(xì)菌反應(yīng)呈現(xiàn)凝集現(xiàn)象,此法用于細(xì)菌快速鑒定和分型.
1.1.2免疫酶技術(shù)
免疫酶技術(shù)( EIA ,Enzymeimmunoa2ssay) 是將酶標(biāo)記的抗抗體與抗原—抗體復(fù)合物結(jié)合形成抗原- 抗體- 酶標(biāo)記抗抗體復(fù)合物,加入酶底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物.以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定( ELISA) 和斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(Dot - ELISA) 應(yīng)用較廣泛.
1.1.3 免疫熒光技術(shù)
免疫熒光技術(shù)( FIA ,Fuorescenceimmunoassay) 是將一抗滴加于待檢抗原上,再加一抗的熒光抗體(二抗) ,呈現(xiàn)特異性的熒光抗原抗體復(fù)合物以鑒定病原菌.此法比ELISA 更直觀,可直接觀察到菌體形態(tài).
1.1.4放射免疫測(cè)定技術(shù)
放射免疫測(cè)定( RIA ,Rad2ioimmunoassay) 是用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體,與相應(yīng)的抗體或抗原結(jié)合后通過放射自顯影定性和定量抗原或抗體.
1.1.5免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)
膠體金是繼酶、熒光素和放射同位素后免疫標(biāo)記技術(shù)中令人矚目的新標(biāo)記物.膠體金是氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、枸櫞酸鈉等的作用下,聚合成特定大小的金顆粒,通過靜電作用與抗體或抗原形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),即為免疫金,免疫金與相應(yīng)的抗原抗體結(jié)合后,呈現(xiàn)特定的顏色反應(yīng).
1.2 　蛋白質(zhì)圖譜分析
蛋白質(zhì)圖譜分析主要采用聚丙烯酰胺凝膠電泳( PAGE,Polyacrylamide Gel Electrophoresis)和SDS -PAGE.聚丙烯酰胺凝膠是單體丙烯酰胺(Acr) 和
N ,N’- 亞甲雙丙烯酰胺(Bis) 在催化劑過硫酸銨和加速劑四甲基乙二胺(TEMED)作用下聚合為含酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長(zhǎng)鏈,相鄰長(zhǎng)鏈通過甲叉橋連接形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì),PAGE 根據(jù)電荷、形狀和分子大小分離和定性、定量分析蛋白質(zhì)和多肽.SDS - PAGE 根據(jù)分子量的不同分離蛋白質(zhì),SDS 是一種陰離子表面活性劑,與蛋白質(zhì)疏水部分結(jié)合使蛋白質(zhì)帶大量負(fù)電荷且使蛋白質(zhì)的形狀趨向一致,抵消了蛋白質(zhì)本身所帶電荷和形狀的影響,因此,樣品分子量的對(duì)數(shù)與其在凝膠中的遷移率呈直線關(guān)系.