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  • 帶酶切位點(diǎn)的引物設(shè)計問題

    帶酶切位點(diǎn)的引物設(shè)計問題
    帶酶切位點(diǎn)的引物設(shè)計時計算Tm值,退火溫度及GC含量時是否要把酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基計算在內(nèi)?我覺得不用,因為酶切位點(diǎn)可以不用跟模板結(jié)合,
    其他人氣:220 ℃時間:2020-02-06 02:54:41
    優(yōu)質(zhì)解答
    我覺得不用吧 計算Tm和退火不是算的雙鏈部分的嘛
    不用計算附加堿基,如果要調(diào)整PCR的特異性,只是提高退火溫度就好了,這個提高不是以附加堿基為基礎(chǔ)的.克隆實驗倒是無所謂,如果你是要在附加堿基中加入一個小Tag等比較長的片段,計算了附加堿基,就有可能擴(kuò)增不出來.
    下面的鏈接有詳細(xì)的討論,樓主可以去參考下
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