通過設(shè)計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段添加限制性酶切位點的原理是什么?百思不得其解,
通過設(shè)計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段添加限制性酶切位點的原理是什么?百思不得其解,
我的意思是說引物人為添加上的酶切位點與要擴增的片段也不匹配,怎么能隨著引物克隆到目的片段上,而使目的片段帶上酶切位點的序列呢?原理是什么呢?
我的意思是說引物人為添加上的酶切位點與要擴增的片段也不匹配,怎么能隨著引物克隆到目的片段上,而使目的片段帶上酶切位點的序列呢?原理是什么呢?
其他人氣：422 ℃時間：2020-03-25 10:40:15
優(yōu)質(zhì)解答
不是隨意添加.酶切位點都加在引物的5‘端.這樣在第一輪擴增后,就會產(chǎn)生有酶切位點的產(chǎn)物了(酶切位點在產(chǎn)物的兩端）.在接下來的擴增中每個產(chǎn)物就都會有了.PCR的時候可以耐受引物的5‘端由數(shù)個不匹配的堿基對.但是隨著擴增的進行,產(chǎn)物都有這些位點后,就不存在不匹配的問題了
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