培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等.有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素.
按所用原料不同,可分為兩類：應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配制的,稱為天然培養(yǎng)基；應用化學藥品配成并標明成分的,稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基.化學試劑中的培養(yǎng)基,大多為合成培養(yǎng)基.由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,現(xiàn)在均改制成粉末.培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同.一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存.對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基）,較長時間的貯存,必須放在2~6.C的冰箱內.
常見培養(yǎng)基有：
1、細菌培養(yǎng)基
配方一 牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化鈉 0.5克,瓊脂 1.5克,
水 100毫升
在燒杯內加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱.待燒杯內各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底.等瓊脂完全溶解后補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2～7.6,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌30分鐘.
配方二 馬鈴薯培養(yǎng)基
取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克,用刀細細剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨.在燒杯上做好記號,煮沸,轉用文火燉2小時.過濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調到7.5左右.每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用.
配方三 根瘤菌培養(yǎng)基
葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克
碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克
酵母粉 0.4克 瓊脂 20克
水 1000毫升 1%結晶紫溶液 1毫升
先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用.
2、放線菌培養(yǎng)基
配方一 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基）
可溶性淀粉 2克 硝酸鉀 0.1克
磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克
硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克
瓊脂 2克 水 100毫升
先把淀粉放在燒杯里,用5毫升水調成糊狀后,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解.在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補足失水.調整pH值到7.2～7.4,分裝后滅菌,備用.
配方二 面粉瓊脂培養(yǎng)基
面粉 60克 瓊脂 20克
水 1000毫升
把面粉用水調成糊狀,加水到500毫升,放在文火上煮30分鐘.另取500毫升水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用.
3、真菌培養(yǎng)基
配方一 薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基
蛋白胨 10克 瓊脂 20克
麥芽糖 40克 水 1000毫升
先把蛋白胨、瓊脂加水后,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,加入40克麥芽糖（或葡萄糖）,攪拌,使它溶解,然后分裝,滅菌,備用.
本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的.
配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基
把馬鈴薯洗凈去皮,取200克切成小塊,加水1000毫升,煮沸半小時后,補足水分.在濾液中加入10克瓊脂,煮沸溶解后加糖20克（用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖,用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖）,補足水分,分裝,滅菌,備用.
把這培養(yǎng)基的pH值調到7.2～7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌.
配方三 黃豆芽汁培養(yǎng)基
黃豆芽 100克 瓊脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升
洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘.用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解后放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000毫升,分裝,滅菌,備用.
把這培養(yǎng)基的pH值調到7.2～7.4,可用來培養(yǎng)細菌和放線菌.
配方四 豌豆瓊脂培養(yǎng)基
豌豆 80粒 瓊脂 5克
水 200毫升
取80粒干豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用.
4、食用菌菌種培養(yǎng)基
配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 瓊脂 18克
把馬鈴薯洗凈去皮后,切成小塊.稱取馬鈴薯小塊200克,加水1000毫升,煮沸20分鐘后,過濾.在濾汁中補足水分到1000毫升,即成20%馬鈴薯煮汁.在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,補足水分,分裝,滅菌,備用.使用該培養(yǎng)基對pH值要求不嚴格,可以不測定.
配方二 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升
磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克
葡萄糖 20克 維生素 10毫克
瓊脂 18克
先配制20%馬鈴薯煮汁,方法同上.在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解后補足水分,調整pH值到6.分裝,滅菌,備用. 該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種.
5.煙草的培養(yǎng)基
在植物組織培養(yǎng)時,通過調節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽
CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化
愈傷組織誘導培養(yǎng)基制備
以MS培養(yǎng)基母液為基礎,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中.
煙草葉片愈傷組織誘導
取一無菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中,并用解
剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種
5小片,一共接種6瓶.接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周,然后在同
樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀
察愈傷組織誘導結果,統(tǒng)計愈傷組織誘導率.
器官分化及植株再生培養(yǎng)
將誘導的愈傷組織按類型分別轉入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22 C條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計愈傷組織再生植株情況.
愈傷組織誘導的總體情況
煙草愈傷組織誘導培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而
未形成愈傷的情況.具體情況見表一中所示,6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)
生污染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導率為
60.0℅, 在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由于實驗過程中,外植
體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整
個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小.
培養(yǎng)基還有:1640培養(yǎng)基
特殊培養(yǎng)基：
一 選擇性培養(yǎng)基
1酵母菌富集培養(yǎng)基
葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05%
孟加拉紅0.003% pH4.5
2 Ashby無氮培養(yǎng)基 富集好養(yǎng)自生固氮菌
甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02%
二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5%
二 鑒別培養(yǎng)基
EMB培養(yǎng)基,常用于鑒別E.coli
蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍0.065g
蒸餾水1000g pH7.2
分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方
2216E培養(yǎng)基配方（固體培養(yǎng)基）
蛋白胨 5克
酵母膏 1克
磷酸高鐵 0.01克
瓊脂 15-----20克
陳海水 1000毫升
煮沸氫氧化納（5%）的溶液調PH值7.6—7.8
其他培養(yǎng)基：
1.高氏一號培養(yǎng)基
KNO3:1g,
NaCl:0.5g,
K2HPO4:0.5g
MgSO4·7H2O：0.5g
FeSO4·7H2O：0.01g
可溶性淀粉20g
瓊脂20g
蒸餾水1000ml
pH調至7.2~7.4,121°C滅菌30min
制法：先用少量水將淀粉調成糊狀,再取700ml水在電爐上加熱煮沸
然后邊攪拌便將淀粉糊倒入,同時保持沸騰.然后再將其他成分加入,
溶解后補足水分至1000ml
肉湯蛋白胨斜面：
蛋白胨10g
牛肉膏5g
蒸餾水1000ml
NaCl：5g
pH：7.0~7.2,121℃滅菌20min
如配制固體培養(yǎng)基需加瓊脂1.5%~2%,半固體培養(yǎng)基可加瓊脂0.5%~0.8%
不同的細胞培養(yǎng)基
天然細胞培養(yǎng)基
天然培養(yǎng)基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等.組織培養(yǎng)技術建立早期,體外培養(yǎng)細胞都是利用天然培養(yǎng)基.但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代.目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少.
血清種類
目前用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等.選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因：來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解.牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適.
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能.牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清.胎牛血清應取自剖腹產的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛.顯然,胎牛血清是品質最高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少.
血清的主要成分
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異.血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的.
血清主要作用
1. 提供基本營養(yǎng)物質：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質.
2. 提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等.生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等.
3. 提供結合蛋白：結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質,如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等,轉鐵蛋白攜帶鐵.結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用.
4. 提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷.
5. 對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用.這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用.因為胰蛋白酶已經被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代.血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用.血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝解毒中起重要作用,如SeO3,硒等.
血清培養(yǎng)基主要問題
1. 血清的成份可能有幾百種之多,目前對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難.
2. 血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制.
3. 對大多數(shù)細胞,在體內狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態(tài),血清可能促進某些細胞的生長（成纖維細胞）同時抑制另一類細胞生長（表皮細胞）.
4. 血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應（如精胺、亞精胺）形成有細胞毒性作用的聚精胺.補體、抗體、細菌毒素等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡.
5. 動物個體不同,血清產地、批號不同,每批質量差異甚大,其成分不能保持一致.
6. 取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產生潛在影響,可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性.
7. 大規(guī)模生產中,血清來源越來越困難,價格昂貴,是構成動物細胞培養(yǎng)對生產成本的主要部分之一.
血清的質量標準
血清質量高低取決于兩方面因素：一是取材對象,二是取材過程.用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內,取材過程應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定.WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產生物制品規(guī)程》中的要求：
1. 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家.并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng).
2. 有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群.
3. 證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物.
4. 血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌.
5. 無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染.
6. 對細胞有良好的支持繁殖作用.
我國在對牛血清的質量2000年版《中國生物制品主要原輔料質控標準》中提出比較嚴格的標準要求.包括蛋白質含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素,支持細胞增殖檢查.