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水質(zhì)微生物
一、水質(zhì)微生物及指示菌
在各種水體,特別是污染水體中存在有大量的有機(jī)物質(zhì),適于各種微生物的生長(zhǎng),因此水體是僅次于土壤的第二種微生物天然培養(yǎng)基.水體中的微生物主要來(lái)源于土壤,以及人類的動(dòng)物的排泄物及污染.水體中微生物的數(shù)量和種類受各種環(huán)境條件的制約.
一般認(rèn)為,水中微生物以革蘭氏陰性桿菌占有較大優(yōu)勢(shì).與其他水體相比,河水及溪水中革蘭氏陽(yáng)性菌相對(duì)較多,這是因?yàn)殛懙匚⑸餂_洗污染的緣故.
水體中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物,大部分是從外界環(huán)境污染而來(lái),特別是人和其它溫血?jiǎng)游锏募S便污染.水中常見(jiàn)的致病性細(xì)菌主要包括：志賀氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、小腸結(jié)炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌等.
在實(shí)際控制中,對(duì)水質(zhì)衛(wèi)生質(zhì)量的評(píng)價(jià)和控制,是無(wú)法對(duì)各種可能存在的致病微生物一一進(jìn)行檢測(cè),而一般利用對(duì)指示菌的檢測(cè)和控制,來(lái)了解水體是否受到過(guò)人畜糞便的污染,是否有腸道病原微生物存在的可能,從而評(píng)價(jià)水的質(zhì)量,以保證水質(zhì)的衛(wèi)生安全.
目前,世界各國(guó)一般認(rèn)為大腸菌群是指示水質(zhì)受糞便污染較好的指示菌.
我國(guó)水質(zhì)控制也采用大腸菌群作為指示菌,GB5749-85《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定,生活飲用水中大腸菌群每升不得超過(guò)3個(gè).
在某些情況下,水體中的細(xì)菌總數(shù)也可指示水體受糞便等污染物污染的情況.這里的細(xì)菌總數(shù)其實(shí)是指營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)后形成的菌落總數(shù).目前世界各國(guó)對(duì)于控制飲用水的衛(wèi)生質(zhì)量,除采用大腸菌群等指標(biāo)外,一般還采用細(xì)菌總數(shù)這個(gè)指標(biāo).我國(guó)GB5749-85《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定生活飲用水細(xì)菌總數(shù)每毫升不得超過(guò)100個(gè).
二、水質(zhì)微生物檢驗(yàn)方法
GB5750-85《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法》提供了水質(zhì)中細(xì)菌總數(shù)和總大腸菌群的檢測(cè)方法.
（一）細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)：
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中,細(xì)菌總數(shù)是指1ml水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中,于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后,所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落的總數(shù).
對(duì)生活飲用水,直接吸取1ml水樣于平皿中,加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂后混勻,37℃培養(yǎng)24h,進(jìn)行計(jì)數(shù).
對(duì)水源水,根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行10倍梯度稀釋,選擇適宜稀釋液1ml,加注平皿,營(yíng)養(yǎng)瓊脂混勻,37℃培養(yǎng)24h,進(jìn)行計(jì)數(shù).
按照規(guī)定格式報(bào)告每毫升水中細(xì)菌總數(shù).
（二）總大腸菌群的檢測(cè)：
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中,利用總大腸菌群作為糞便污染的指標(biāo).總大腸菌群是指一群需氧及兼性厭氧的,37℃生長(zhǎng)時(shí)能使乳糖發(fā)酵,在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌.水樣中總大腸菌群數(shù)的含量,表明水被糞便污染的程度,而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能.
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)提供了多管發(fā)酵法及濾膜法檢測(cè)總大腸菌群的方法.
多管發(fā)酵法檢測(cè)總大腸菌群,分為三步：初發(fā)酵試驗(yàn),平板分離,復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn).初發(fā)酵試驗(yàn),采用乳糖蛋白胨培養(yǎng)液37℃培養(yǎng)24h,觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況.對(duì)陽(yáng)性管培養(yǎng)物,接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基,觀察菌落特征,并進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢.對(duì)典型和可疑菌落,接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,進(jìn)行復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn),并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)所附檢數(shù)表報(bào)告結(jié)果.
其中,對(duì)生活飲用水,初發(fā)酵試驗(yàn)接種水樣總量300ml,即100ml接種2管,10ml接種10管,采用兩個(gè)稀釋度,12支發(fā)酵管.對(duì)水源水,初發(fā)酵試驗(yàn)接種水樣總量55.5ml,即10ml接種5管,1ml接種5管,0.1ml接種10管,共采用三個(gè)稀釋度,15支發(fā)酵管.兩種接種方法,所用的檢數(shù)表是不同的.
濾膜法檢測(cè)總大腸菌群,就是利用微孔濾膜,過(guò)濾一定量水樣,將水樣中含有的細(xì)菌截留在濾膜上,然后將濾膜帖放在選擇性培養(yǎng)基上（如品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基）,經(jīng)培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)后,直接計(jì)數(shù)濾膜上生長(zhǎng)的典型大腸菌群菌落,并計(jì)算出每升水樣中含有的總大腸菌群數(shù).
三、說(shuō)明：
1．菌落總數(shù)測(cè)定中,應(yīng)選擇合適的稀釋度進(jìn)行.生活飲用水,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過(guò)100個(gè),因此可以直接吸取1毫升到平板進(jìn)行培養(yǎng).
2．培養(yǎng)時(shí)間.與食品中菌落計(jì)數(shù)不同,測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù),培養(yǎng)時(shí)間采用24h.
3．總大腸菌群的測(cè)定方法,由于飲用水和水源水可能的污染程度不同,因此采用不同的接種量,檢數(shù)表也不相同.
4．當(dāng)接種量超過(guò)1毫升時(shí),一般采用多倍濃度培養(yǎng)液.如配制3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液50mL,加入100mL水樣后,總體積為150mL,培養(yǎng)液恢復(fù)到正常濃度.
5．濾膜法檢測(cè)總大腸菌群,一般在檢測(cè)較大量低濁度水樣時(shí)采用,大量水樣濾過(guò)濾膜后,水中所含有的所有細(xì)菌均截留在濾膜上.