western blot中,封閉液封閉完成后,需要用PBS或PBST洗滌濾膜,然后進行一抗孵育,在一抗孵育完成后為什么要清洗濾膜上的磷酸鹽,磷酸鹽對后續(xù)的加入二抗有什么影響?
western blot中,封閉液封閉完成后,需要用PBS或PBST洗滌濾膜,然后進行一抗孵育,在一抗孵育完成后為什么要清洗濾膜上的磷酸鹽,磷酸鹽對后續(xù)的加入二抗有什么影響?
一抗孵育完成后，我是知道洗膜的，可是《分子克隆》上說要清洗掉磷酸鹽與疊氮鈉，清洗疊氮鈉我知道為什么，可是不知道為什么要清洗掉磷酸鹽，因為在網(wǎng)上有不少資料在洗膜過程中是不用換掉PBS的（因PBS中含有磷酸鹽），可是《分子克隆》上說要在一抗孵育完成后用TBST洗濾膜，
一抗孵育完成后，我是知道洗膜的，可是《分子克隆》上說要清洗掉磷酸鹽與疊氮鈉，清洗疊氮鈉我知道為什么，可是不知道為什么要清洗掉磷酸鹽，因為在網(wǎng)上有不少資料在洗膜過程中是不用換掉PBS的（因PBS中含有磷酸鹽），可是《分子克隆》上說要在一抗孵育完成后用TBST洗濾膜，
其他人氣：352 ℃時間：2020-05-23 00:46:26
優(yōu)質(zhì)解答
一抗孵育完成后洗膜是為了洗掉未和膜結(jié)合的抗體,而不是磷酸鹽.只有洗干凈非特異性結(jié)合在膜上的一抗,加二抗時才不會因非特異結(jié)合而呈現(xiàn)很重的背景.至于是使用PBS(T)還是TBS(T),這要具體看你的二抗種類.PBS不適合AP系列,PBS/TBSS適合AP和HRP體系.另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合適.
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