設(shè)計引物的時候已經(jīng)用到了兩條鏈吧,一條鏈設(shè)計前引物,另一條設(shè)計后引物.RT-PCR得到的是雙鏈cDNA,所以用mRNA設(shè)計或者用互補鏈設(shè)計都可以啊,因為著兩條鏈都會用到,只要把U換成T,是絕對可以P出來的.逆轉(zhuǎn)錄分三步，第一步是以mRNA為模板形成一條單鏈cDNA，第二步是水解mRNA，第三步是以單鏈cDNA為模板形成雙鏈cDNA。大多數(shù)反轉(zhuǎn)錄酶都具有多種酶活性，主要包括以下幾種活性。①DNA聚合酶活性；以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物，多為賴氨酸的tRNA，在引物tRNA 3'－末端以5'→3'方向合成DNA。反轉(zhuǎn)錄酶中不具有3'→5'外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。②RNase H活性；由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNase H從RNA 5'端水解掉RNA分子。③DNA指導的DNA聚合酶活性；以反轉(zhuǎn)錄合成的第一條DNA單鏈為模板，以dNTP為底物，再合成第二條DNA分子