巧克力培養(yǎng)基
【用途】主要用于嗜血桿菌的分離,亦可用于奈瑟菌的增菌培養(yǎng).
【原理】流感嗜血桿菌培養(yǎng)時,需要依賴血液中的X及V因子方能生長繁殖,當培養(yǎng)基加熱至80～90℃時,可使血液中的紅細胞破裂,以利于嗜血桿菌,奈瑟菌等的生長培養(yǎng).凡疑有這些菌種存在的標本,均應接種巧克力平板.血液標本培養(yǎng),增菌后又細菌生長,若移種巧克力平板上,有利于分離更多的細菌.
【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化鈉5瓊脂15無菌脫纖維馬血、羊血或兔血100mlpH7.7.4
【制備】將前四項成分混合,加熱溶化,校對pH,高壓滅菌（121℃15min）后在80～90℃以無菌方法加入血液,搖勻后置90℃水浴中.維持該溫度15min,使之呈巧克力色取出,至室溫冷至約50℃,傾制平板 .凝固后,抽樣置于35℃培養(yǎng)18～24h,如無細菌生長,冷藏備用.
【接種】將可疑標本直接劃線接種于該培養(yǎng)基上,置35℃普通培養(yǎng)或置含5%～10%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)18～24h,取出觀察細菌生長狀況.
【觀察結(jié)果】流感嗜血桿菌菌落微小(0.8mm),無色透明、光滑整齊、似露滴狀,48h后達1.5mm,從血液或腦脊液中分離的菌落往往形成液狀,菌落較大,老培養(yǎng)物菌落中心呈凹陷.
【質(zhì)量控制】流感嗜血桿菌ATCC10211,生長良好,菌落典型.肺炎鏈球菌,ATCC6305,生長良好,菌落典型.
【保存】置冰箱,1周內(nèi)用完.