如果將PCR擴增的X基因片段與克隆載體連接,并轉(zhuǎn)化入宿主大腸桿菌中,寫出技術路線（包括基因和載體的連接、轉(zhuǎn)化和鑒定）和關鍵點.

其他人氣：617 ℃時間：2020-02-03 08:34:52

優(yōu)質(zhì)解答

已經(jīng)得到擴增的目的基因片段和克隆載體→對兩者分別進行酶切（選要相同的限制性內(nèi)切酶對兩者進行切割）→酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收→克隆載體和目的基因進行連接（一般選用T4連接酶）→大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備（常見的有氯化鈣法）→轉(zhuǎn)化（將重組載體導入感受態(tài)細胞中）→將上一步得到的大腸桿菌進行涂板,倒置培養(yǎng)18-20個小時→篩選和快速鑒定（直接挑取單克隆菌落,進行菌落PCR,電泳檢測PCR產(chǎn)物,挑取陽性克隆的菌落）