分離葉綠體色素常用的紙層析法是一種分配層析.分配層析的原理是,利用混合物各組分在流動相和固定相兩種不同溶劑中的分配系數(shù)差異,將它們分離.
在紙層析中的流動相是指層析液,在毛細(xì)拉力作用下,層析液能不斷由下向上流動.固定相是指被吸附在濾紙纖維之間的水分.由于纖維素上的羥基具親水性使這部分水束縛在纖維素周圍,不易擴(kuò)散而成為固定相.在層析過程中,當(dāng)層析液在毛細(xì)拉力作用下,上升流經(jīng)色素濾液細(xì)線時,濾液細(xì)線上的色素就相繼融入層析液,隨著層析液上升,并發(fā)生在分配,即有一部分色素從層析液分配溶解到固定相中,直到平衡.由于分配系數(shù)的不同,那些分配系數(shù)大的色素分子,隨層析液向上移動得快,形成的色素帶集中在濾紙的上部；而分配系數(shù)小的色素分子,隨層析向上移動得慢,形成的色素帶集中在濾紙的下面.